[发明专利]含有DNA甲基化状态改变的神经再生细胞

权利要求书

1.一种改变细胞基因甲基化状态的方法，该方法包括：

(a)用包含编码Notch胞内结构域序列的多核苷酸转染细胞；和

(b)培养转染的细胞，，使该细胞或该细胞的一个或多个后代中所述基因的甲基化状态与未转染细胞中的该基因相比发生改变。

2.一种制备细胞中某基因甲基化状态改变的后代细胞的方法，该方法包括：

(a)用包含编码Notch胞内结构域序列的多核苷酸转染祖细胞；

(b)培养转染细胞；和

(c)从转染细胞的后代中获得其中所述基因甲基化状态改变的一个或多个后代细胞。

3.一种将祖细胞转变成神经再生细胞的方法，该方法包括改变祖细胞中一种或多种基因的甲基化状态。

4.一种通过体外培养从祖细胞传代产生的后代细胞，其中：

(a)所述后代细胞能支持神经组织生长和/或再生；

(b)所述后代细胞中一种或多种基因的甲基化状态与祖细胞相比发生改变；和

(c)在体外培养期间，不用包含编码Notch胞内结构域(NICD)序列的多核苷酸转染祖细胞及其任何后代细胞。

5.如权利要求1、2或3所述的方法或如权利要求4所述的细胞，其特征在于，所述基因选自：PITX2、DNMT3b、IGF2R和SDF4。

6.如权利要求1、2或3所述的方法或如权利要求4所述的细胞，其特征在于，所述基因选自：ROPN1L和TMEM179。

7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述后代细胞中所述基因的甲基化增加。

8.如权利要求1-4或6中任一项所述的方法或细胞，其特征在于，所述后代细胞中所述基因的甲基化降低。

9.如权利要求8所述的方法或细胞，其特征在于，序列C-A-T-C^甲基-G-C-C-C转变成C-A-T-C-G-C-C-C。

10.如权利要求1-5或9中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞是骨髓的粘附性基质细胞(MASC)。

11.如权利要求2-9中任一项所述的方法或细胞，其特征在于，所述祖细胞是骨髓的粘附性基质细胞(MASC)。

12.如权利要求3所述的方法，其特征在于，通过以下步骤改变所述基因的甲基化状态：

(a)用包含编码Notch胞内结构域序列的多核苷酸转染祖细胞；

(b)培养转染细胞；和

(c)从转染细胞的后代中获得其中所述基因甲基化状态改变的一个或多个后代细胞；

所述基因甲基化状态改变的所述后代细胞是神经再生细胞。

13.如权利要求7所述的方法，其特征在于，通过以下步骤改变所述基因的甲基化状态：使祖细胞接触包含甲基化结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白，或接触编码包含甲基化结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白的核酸，其中所述DNA结合结构域经工程改造能结合所述基因中的一个或多个序列。

14.如权利要求8所述的方法，其特征在于，通过以下步骤改变所述基因的甲基化状态：使所述祖细胞接触包含脱甲基结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白，或接触编码包含脱甲基结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白的核酸，其中所述DNA结合结构域经工程改造能结合所述基因中的一个或多个序列。

15.如权利要求4所述的细胞，其特征在于，通过以下步骤改变所述基因的甲基化状态：使所述祖细胞接触包含甲基化结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白，或接触编码包含甲基化结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白的核酸，其中所述DNA结合结构域经工程改造能结合所述基因中的一个或多个序列。

16.如权利要求4所述的细胞，其特征在于，通过以下步骤改变所述基因的甲基化状态：使所述祖细胞接触包含脱甲基结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白，或接触编码包含脱甲基结构域和DNA-结合结构域的融合蛋白的核酸，其中所述DNA结合结构域经工程改造能结合所述基因中的一个或多个序列。

17.一种鉴定神经再生细胞的方法，该方法包括检验所述细胞中一种或多种基因的甲基化状态，其中被检验基因的甲基化状态发生改变表明该细胞是神经再生细胞。