[发明专利]使用荧光淬灭和/或漂白分析个体细胞或微粒的方法及设备

权利要求书

1.一种用于分析血液样本的方法，包括以下步骤：

将样本滴落在适于静止保持样本以进行分析的分析腔室中，该腔室由第一平板和第二平板限定，这两个平板都是透明的，所述样本具有一个或多个第一组分和一个或多个第二组分，其中，第二组分与第一组分不同；

将染色剂掺合到样本中，该染色剂用于使第一组分和第二组分在暴露于预定的第一波长的光时发出荧光，并且该染色剂用于吸收一个或多个预定的第二波长的光；

以第一波长和第二波长的光照射包含第一组分和第二组分的样本的至少一部分；

对所述的样本的至少一部分成像，包括产生表示来自第一组分和第二组分的荧光发射以及第一组分和第二组分的光密度的图像信号；

使用图像信号，确定第一组分和第二组分中的每一组分的一个或多个荧光发射值；

使用图像信号，确定第一组分和第二组分中的每一组分的一个或多个光密度值，所述光密度是组分所吸收的染色剂的函数；以及

使用所确定的荧光发射值和光密度值来识别第一组分和第二组分。

2.如权利要求1所述的方法，其中血液样本实质上未被稀释。

3.如权利要求1所述的方法，其中血液样本是全血。

4.如权利要求1所述的方法，其中第一组分和第二组分选自由白细胞和微粒组成的组中。

5.如权利要求4所述的方法，其中第一组分和第二组分均是白细胞的类型。

6.如权利要求5所述的方法，其中基于每个像素来确定第一组分中的每一个和第二组分中的每一个的一个或多个荧光发射值。

7.如权利要求6所述的方法，其中每个第一组分和每个第二组分中的至少一个是使用从该组分内的一个区域确定的荧光发射值来识别的，该区域的荧光发射值相对于该组分的其他区域中的荧光值来说高于平均强度。

8.如权利要求7所述的方法，其中基于每个像素来确定第一组分中的每一个和第二组分中的每一个的一个或多个光密度值。

9.如权利要求8所述的方法，其中每个第一组分和每个第二组分中的至少一个是使用从该组分内的一个区域确定的光密度值来识别的，该区域的光密度值相对于该组分的其他区域中的光密度值来说高于平均大小。

10.根据权利要求7所述的方法，还包括对所确定的第一组分和第二组分中的每一个的至少一部分内的光密度值进行平均的步骤；以及

其中使用所确定的荧光发射值和光密度值来识别第一组分和第二组分的步骤包括将所确定的每个组分的平均光密度值与预定的光密度值进行比较。

11.如权利要求10所述的方法，其中第一组分和第二组分选自由嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞组成的组中。

12.如权利要求5所述的方法，还包括对所确定的第一组分和第二组分中的每一个的至少一部分内的光密度值进行平均的步骤；以及

其中使用所确定的荧光发射值和光密度值来识别第一组分和第二组分的步骤包括将所确定的光密度值与经验数据进行比较以将第一组分和第二组分区分开。

13.如权利要求12所述的方法，其中第一组分和第二组分选自由嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞组成的组中。

14.如权利要求5所述的方法，其中使用所确定的荧光发射值和光密度值来识别第一组分和第二组分的步骤包括为特定细胞来确定所确定的荧光发射值与所确定的光密度值的比率。

15.如权利要求14所述的方法，其中第一组分和第二组分选自由嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞组成的组中。

16.如权利要求14所述的方法，其中所述比率是为一个细胞确定的荧光发射值的平均与为该细胞确定的光密度值的平均的比。

17.如权利要求14所述的方法，还包括为第一组分和第二组分中的每一个来确定所确定的荧光发射值与所确定的光密度值之间的比率并且对该比率进行统计估计以识别第一组分和第二组分的步骤。

18.如权利要求5所述的方法，其中使用所确定的荧光发射值和光密度值来识别第一组分和第二组分的步骤仅仅利用了第一组分和第二组分中的每一个的细胞质区域的荧光发射和光密度。