[发明专利]粪便处理方法及粪便处理容器

说明书

技术领域

本发明涉及用于从粪便中有效地回收核酸的粪便处理方法及粪便处理容器。

本申请要求2008年5月12日在日本申请的日本特愿2008-125143号的优先权，并将其内容援引于此。

背景技术

如今，与欧美同样，日本结肠癌的患者数也在逐年急剧增加，结肠癌已占居癌症死亡率的前几位。其原因认为是日本人的饮食生活转变成欧美型的以肉食为中心。具体而言，每年约6万人左右罹患结肠癌。在按照脏器分类的死亡数方面，结肠癌排在第三位，仅次于胃癌、肺癌，预测今后也会进一步增加。另一方面，结肠癌与其他癌不同，通过在发病初期进行治疗，近100％能够治愈。因此，将结肠癌作为早期癌诊察的对象是非常有意义的，用于早期发现结肠癌的检查方法的研究和开发正在盛行。

作为用于早期发现结肠癌的检查方法，进行的有例如灌肠检查、结肠镜(colonoscopic)检查等。灌肠检查是如下检查：向大肠中注入钡使其附着于大肠的粘膜面，照射X射线拍摄该表面的凹凸，观察大肠的表面。另一方面，结肠镜检查是通过内窥镜直接观察大肠内部的检查。特别是结肠镜检查的灵敏度和特异性高，还具有能够同时切除息肉和早期癌的优点。

然而，这些检查方法存在成本高、给受试者带来的负担大、伴随并发症的风险的问题。例如，灌肠检查中存在X射线暴露和肠梗阻的危险性。另外，结肠镜检查由于将内窥镜直接插入大肠内因此对受试者具有侵入性。进而，需要内窥镜操作熟练，能够检查的设施有限。因此，这些检查方法不适于定期体检等以无症状的普通人为对象的结肠癌检查。

近年来，作为结肠癌的一次筛查方法，正广泛实施一种非侵入性且低成本的粪便潜血检查。粪便潜血检查是调查粪便中所含的红细胞来源的血红蛋白的有无的检查，是间接预测结肠癌的存在的方法。作为粪便潜血检查被广泛利用的主要原因，可列举出：可在常温下进行粪便的采集和保存，不需要冷藏和冷冻等特殊的保存条件；以及，可以在普通家庭简单地进行；操作非常简便。但是，在粪便潜血检查中，存在灵敏度低至25％左右、漏检结肠癌的概率高的问题。进而，阳性命中率也低，粪便潜血检查为阳性的受试者中实际为结肠癌患者的比例为10％以下，包括很多假阳性。因此，强烈期望开发可靠性更高的新型检查方法。

作为适于定期体检等的、非侵入性、简便、且可靠性高的新型检查方法，调查粪便中有无癌细胞或有无癌细胞来源的基因的检查受到瞩目。这些检查方法由于直接调查有无癌细胞或癌细胞来源的基因，因此通常认为，与调查有无产生伴随结肠癌的患病间接产生的消化道出血的粪便潜血检查法相比，该检查方法可靠性更高。

为了以高精度检测粪便中的癌细胞等，有效地回收粪便中的癌细胞来源的核酸很重要。特别是，由于粪便中的癌细胞来源的核酸为微量，且粪便中含有大量消化残留物和细菌，因此核酸非常容易被分解。因此，为了有效地从粪便试样回收核酸、特别是人等哺乳动物细胞来源的核酸，重要的是调制粪便试样以防止粪便中核酸的分解并且能够稳定地保存至检查操作时为止。作为这种粪便试样的粪便处理方法，例如有从采集的粪便中分离从大肠等消化道脱落的癌细胞的方法。通过从粪便中分离癌细胞，可以抑制细菌等来源的蛋白酶、DNase、RNase等分解酶造成的影响。作为从粪便中分离癌细胞的方法，例如公开了一种从粪便中分离细胞的方法，其将粪便冷却至低于其凝胶凝固点(gel freezing point)的温度，维持粪便温度低于凝胶凝固点以使得粪便实质上保持完好的状态的同时采集细胞(例如，参照专利文献1)。另外，公开了以下方法：在通常周围温度下将粪便分散到含有蛋白酶抑制物质、粘液溶解剂和杀菌剂的运输培养基中，然后分离从大肠脱落的细胞(例如，参照专利文献2)。

另一方面，在组织学及细胞学上观察细胞的形态的情况下，为了使采集的细胞形态维持到观察时为止，以往一直实行福尔马林固定、醇固定等多种固定方法。作为应用这些固定方法的方法，公开了使用以下的特殊细胞溶液保存剂作为能够进行哺乳动物细胞试样的长期保存及保存后的细胞观察的保存溶液的试样处理方法(例如，参照专利文献3)。该细胞溶液保存剂含有：足以固定哺乳动物细胞的量的水；能够混合的醇；足以防止溶液中哺乳动物细胞凝集的量的抗凝剂；保存细胞的期间将溶液的pH保持在4～7的范围的缓冲剂。