[发明专利]用于产生小毛囊和新生乳头的方法及其用于体外测试和体内植入的用途

权利要求书

1.用于产生哺乳动物小毛囊的方法，其包括以下步骤：

(a)提供至少一个新生乳头，

(b)提供选自成纤维细胞、角质形成细胞和/或黑素细胞的至少一种其他细胞群，以及

(c)在非贴壁培养条件下将所述新生乳头与所述至少一种其他细胞群进行共培养。

2.根据权利要求1的方法，其中所述至少一种其他细胞群来源于和/或可来源于哺乳动物毛囊，其选自结缔组织鞘成纤维细胞、角质形成细胞和/或黑素细胞。

3.根据权利要求1或2的方法，其中步骤(a)的新生乳头包被有细胞外基质蛋白，优选胶原蛋白IV、纤连蛋白和/或层粘连蛋白。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述新生乳头根据权利要求6至10中任一项的方法之一来产生。

5.通过根据权利要求1至4之一的方法所产生的小毛囊。

6.产生可用于权利要求1至4任一项之方法的新生乳头的方法，其包括以下步骤：

(a)提供来自至少一个哺乳动物毛囊的至少一个真皮乳头(DP)，

(b)通过将所述DP机械固定在细胞培养容器表面上而从所述DP中分离真皮毛乳头成纤维细胞(DPF)，其中所述基底层有孔以允许所述DPF迁移出来，

(c)在无胶原蛋白包被的单层培养中扩增所分离的DPF，其中所述DPF至少传代一次，

(d)将扩增的DPF浓缩成显示生理DP大小和形状的细胞聚集物，其中将所述DPF以每容器表面1000到100,000个DPF/cm²的细胞浓度在非贴壁培养容器中进行分化，以及

(e)用细胞外基质蛋白包被所述新生乳头，优选用胶原蛋白IV、纤连蛋白和/或层粘连蛋白进行包被。

7.产生可用于权利要求1至4任一项之方法的新生乳头的方法，其包括以下步骤：

(a)提供来自至少一个哺乳动物毛囊的至少一个真皮乳头(DP)，

(b)通过将所述DP机械固定在细胞培养容器表面上而从所述DP中分离真皮毛乳头成纤维细胞(DPF)，其中所述基底层有孔以允许所述DPF迁移出来，

(c)在无胶原蛋白包被的单层培养中扩增所分离的DPF，其中所述DPF至少传代一次，

(d)将扩增的DPF浓缩成显示生理DP大小和形状的细胞聚集物，其中将所述DPF以每容器表面1,000到100,000个DPF/cm²的细胞浓度在非贴壁培养容器中进行分化，其中将所扩增的细胞浓缩至少48小时。

8.根据权利要求7的方法，其中将所扩增的DPF浓缩2至21天或3至15天。

9.根据权利要求7或8的方法，其还包括以下步骤：

(e)用细胞外基质蛋白包被所述新生乳头，优选用胶原蛋白IV、纤连蛋白和/或层粘连蛋白进行包被。

10.根据权利要求6至9中任一项的方法，其中在步骤(d)中对非诱导性DPF进行浓缩。

11.通过根据权利要求6至10中任一项的方法所产生的新生乳头。

12.皮肤等同物，其含有根据权利要求5的小毛囊或根据权利要求11的新生乳头。

13.植入物，其含有根据权利要求5的小毛囊和/或根据权利要求11的新生乳头作为活性成分，其任选地还包含可药用辅剂。

14.移植物，其含有有效剂量的根据权利要求12的皮肤等同物作为活性成分，其任选与可药用辅剂一起使用。

15.根据权利要求5的小毛囊、根据权利要求11的新生乳头和/或根据权利要求12的皮肤等同物，其用于预防或治疗性处理毛发量减少的状况。

16.试剂盒，其含有根据权利要求5的小毛囊、根据权利要求11的新生乳头、根据权利要求12的皮肤等同物、根据权利要求12的植入物和/或根据权利要求14的移植物。

17.根据权利要求5的小毛囊、根据权利要求11的新生乳头和/或根据权利要求12的皮肤等同物用于对物质的毛发调节作用进行体外测试的用途。

18.根据权利要求5的小毛囊、根据权利要求11的新生乳头和/或根据权利要求12的皮肤等同物用于对物质的毒性作用进行体外测试的用途。