[发明专利]细胞毒性组合物

说明书

技术领域

本发明涉及细胞毒性组合物，其是以基因重组的IgG抗体为有效成分，所述本发明IgG抗体比天然来源抗体或者从CHO培养细胞制得的抗体具有更高的补体依赖性细胞毒(CDC)活性。

背景技术

抗体是被称作免疫球蛋白的糖蛋白，在属于淋巴细胞的B细胞中产生。作为抗体的特性，可以识别特定的分子结构(抗原)，且具有很高的结合能力，从而将入侵生物组织的细菌和病毒等非自体蛋白排除，在对感染的防御中发挥重要作用(非专利文献1)。

由来自单一抗体产生细胞的克隆制备得到具有均一的性质的抗体(单克隆抗体)成为了可能，以作为癌细胞和免疫疾病产生原因的特定抗原为靶标的抗体药物得到了实用化。制备单克隆抗体时，通常采用的方法是从小鼠细胞获得针对抗原的抗体，但对于人体给药，为了防止排斥反应，有必要将恒定区等变为人抗体的氨基酸序列。

抗体药物由于具有很高的特异性，可以成为癌症和自体免疫疾病的有效药物(非专利文献2)，但是其缺点在于制造成本高，导致医疗费用增高。所以期待对其制造方法进行改善，转基因(基因重组)鸡等动物工厂是研究低成本生产抗体的一个方案(专利文献1)。

此外，伴随着实用化的抗体药品临床知识日渐丰富，发现其效果并非充分，有必要研制出效果更好的抗体。为了提高抗体的药效而研究增强其活性，不仅有利于提高药效，而且可以降低给药量，从而有助于降低成本。

为了制造具有更高活性的抗体，通过基因重组技术改变抗体的糖链和氨基酸，从而对提高抗体依赖性细胞毒(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity：ADCC)活性和补体依赖性细胞毒(complement-dependent cytotoxicity：CDC)活性的方法进行研究(专利文献2)。已经知道，通过除去结合于抗体Fc区域的N-糖苷键复合物糖链中的岩藻糖，可提高ADCC活性的效果。此外还知道，在转基因鸡的卵清中产生的抗体，通过导入基因的表达，其N-糖苷键复合物糖链中的岩藻糖含量低，所以ADCC活性高(非专利文献3)。

按照这样的方法，通过人工改变糖链，可以提高ADCC活性，但是提高CDC活性的实用的方法还未知。如上所述，如果抗体Fc区域的N-糖苷键复合物糖链中不含有岩藻糖，可以预测其ADCC活性高，但是在这种情况下，其CDC活性未必高。IgG抗体中存在子类，作为抗体药品，多采用药效高，且可选择性地与蛋白质A结合从而容易被纯化的IgG1。但是IgG3抗体的CDC活性较高，公知可以通过将IgG1抗体的一部分Fc区域替换为IgG3抗体的氨基酸，人工制造出CDC活性提高的抗体药物。但是这种在IgG子类间变换结构的嵌合抗体在天然中并不存在，可能会出现预期不到的副作用(抗原性)，所以期望在不改变抗体Fc区域蛋白质一级结构的条件下提高CDC活性的技术。

CDC活性对于高效率地排除靶细胞发挥重大作用，所以该活性高的IgG抗体，期待在抗癌或者被用作改善过敏反应以及特异反应性等自体免疫疾病的抗体药品时具有良好效果。CDC活性在非霍奇金淋巴瘤治疗用抗体利妥昔单抗(rituximab)的抗癌作用机制中发挥着很大的作用(非专利文献4)，因此，在不改变天然氨基酸结构的前提下以更低成本制造具有高CDC活性的IgG抗体技术，对于现代生活中高罹患率的癌症患者和自体免疫疾病患者而言是一个福音。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2004/016081

专利文献2：WO2007/011041

非专利文献

非专利文献1：Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，Wiley-Liss，Inc.(1995)

非专利文献2：Nature Reviews Cancer，1，119(2001)

非专利文献3：Nature Biotechnology，28，1038(2005)

非专利文献4：Biochemi.Soc.Trans，25：705(1997)

发明内容

发明要解决的问题

有必要提供在不改变天然蛋白质的一级结构的条件下，CDC活性和ADCC活性等与治疗效果有关机能提高的抗体组合物及其低成本制造方法。

解决问题的方法