[发明专利]由(Z)-6,7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮制备ε-己内酰胺

权利要求书

1.用于制备ε-己内酰胺的方法，所述方法包括还原(Z)-6，7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮的碳-碳双键，其中所述还原由生物催化剂催化。

2.根据权利要求1的方法，其中所述生物催化剂具有(Z)-6，7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮烯酮还原酶活性。

3.根据权利要求2的方法，其中所述生物催化剂包含选自氧化还原酶(EC1)的组的酶。

4.根据权利要求3的方法，其中所述氧化还原酶选自作用于CH-CH供体(EC1.3)的氧化还原酶和作用于NADH或NADPH(EC 1.6)的氧化还原酶的组。

5.根据权利要求4的方法，其中所述氧化还原酶选自2-烯酮还原酶(EC 1.3.1.33)和旧黄酶(EC 1.6.99.1)的组。

6.根据权利要求2-5中任意一项所述的方法，其中存在所述酶的辅因子，尤其是选自NADPH、NADH、FADH和醌的组的辅因子。

7.根据前述权利要求中任一的方法，其中所述酶选自来自下述生物或所述生物的部分的能够催化(Z)-6，7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮烯酮还原的酶组，所述生物选自Candida、Kluyveromyces、Saccharomyces、Pseudomonas、Escherichia和Bacillus的组。

8.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述生物催化剂包含下述多肽，所述多肽包含Sequence ID 2、4、6、8、10、12、14所示的氨基酸序列或其同源物。

9.根据权利要求8的方法，其中所述氨基酸序列与所述Sequence ID中的任一条具有至少80％、尤其是至少90％、更尤其是至少95％的序列同一性。

10.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述方法在水性环境中进行。

11.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中通过从α-氨基-ε-己内酰胺中去除α-氨基来制备(Z)-6，7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮。

12.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述α-氨基-ε-己内酰胺是从赖氨酸制备的。

13.包含下述核酸序列的重组宿主细胞，所述核酸序列编码具有(Z)-6，7-二氢-1H-氮杂卓-2(5H)-酮烯酮还原酶活性的生物催化剂。

14.根据权利要求13的宿主细胞，其中具有烯酮还原酶活性的所述生物催化剂包含SEQ ID 35-38中任一条中所定义的核酸序列或其非野生型功能类似物。

15.根据权利要求13或14的宿主细胞，所述宿主细胞包含编码具有L-赖氨酸环化酶活性的生物催化剂的核酸序列。

16.根据权利要求13、14或15的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自由Aspergillus、Penicillium、Saccharomyces、Kluyveromyces、Pichia、Candida、Hansenula、Bacillus、Corynebacterium和Escherichia属组成的组。

17.包含Sequence ID 35-38中任一条中定义的核酸序列或其功能性类似物的多核苷酸。