[发明专利]编码甲病毒属复制酶的表达载体及其作为免疫佐剂的用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫用品领域，特别涉及疫苗领域，并且涉及适用于疫苗组合物的佐剂。

背景技术

为了在包括定居在如皮肤、肠道、上呼吸道和下呼吸道、泌尿生殖道等小生境中的大量微生物的环境中存活，哺乳动物的免疫系统已经进化。部分小生境如结肠和皮肤本质上被内源性微生物群占据，而其它小生境(内脏器官和下呼吸道)在免疫活性宿主内通常保持无菌。微生物可对宿主发挥积极作用，如很多肠道共生细菌。在其它情况下，微生物侵入对于宿主可能是有害的。这种消极作用取决于宿主免疫系统的情况-某些病原体(称作机会病原体)仅影响免疫系统受损的个体。微生物感染的潜在有害作用已经引起多种宿主防御机能的进化。在有颌类脊椎动物中，存在两种类型的防御：先天性免疫应答和适应性免疫应答。二者的主要区别在于用于识别病原体的受体类型、激发应答需要的时间延迟和是否存在记忆。这两类防御不能完全相互独立地进作。如在下文中所述，先天性免疫系统向适应性免疫系统发出特定信号，有助于激发对特定病原体最有效的应答；反之亦然，即适应性免疫系统也激活先天性免疫系统的部分模块。

先天性免疫应答

先天性免疫总是存在于健康的个体中，其主要功能在于阻止微生物和病毒侵入，以及快速除去成功侵入宿主组织中的病原体。先天性免疫为多细胞有机体提供即时保护。

先天性免疫系统不是单一实体。该体系是在不同进化阶段出现的不同模块或子系统的集合：

·产生抗微生物肽、防止宿主被病原体侵入的黏膜上皮；

·针对细胞内细菌和细胞外细菌具有抗微生物机能的吞噬细胞；

·在血液循环和体液中发挥作用的急性期蛋白和补体系统；

·参与杀伤病毒感染的细胞的自然杀伤细胞；

·参与抗多细胞寄生虫保护的嗜曙红细胞、嗜碱细胞和肥大细胞；

·在病毒防御中起到关键作用的I型干扰素以及由其诱导的蛋白质。

先天性免疫应答负责侵入微生物的早期检测和杀伤，并依赖于一组有限的胚系细胞编码的用于检测的模式识别受体(PRR)。为引发免疫应答，PRR识别病原相关分子模式(PAMP)，并诱导数个细胞外级联激活，例如导致炎症反应的补体途径和各种分子内信号途径。

先天性免疫系统利用存在于三个不同分离部分的PRR，所述分离部分为：体液、细胞膜和细胞质。体液中的PRR在PAMP调理作用、补体途径的激活和某些情况下PAMP向其它PRR的转移中起主要作用。位于细胞膜上的PRR具有多种功能，例如呈递PAMP至其它PRR，促进通过吞噬作用进行的微生物摄取以及引发主信号途径。

存在功能不同的多种PRR。最具特征的一种为Toll样受体(TLR)。识别病毒核酸和多种细菌产物的跨膜受体是产生初级信号的PRR，所述细菌产物包括脂多糖和脂磷壁酸(Akira，S 2006)。另外，细胞质PRR可分为三类：干扰素(IFN)-诱导蛋白、胱天蛋白酶募集域(CARD)螺旋酶和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)。研究最充分的IFN诱导型抗病毒蛋白质为抗黏液病毒蛋白(Mx)家族、蛋白激酶R(PKR)、寡腺苷酸合成酶(2’-5’OAS)。这些抗病毒蛋白和CARD螺旋酶(例如RIG-I和Mda5)参与抗病毒防御。相反，NLR主要参与抗菌免疫应答。

Toll样受体(TLR)

TLR是PRR中最具特征的信号生成受体。其引发关键的炎症反应，并形成适应性免疫。哺乳动物中已知的所有TLR(TLR1-11)均为I型膜内在糖蛋白，所述膜内在糖蛋白包括负责配体识别的细胞外亮氨酸富集重复(LRR)结构域以及用于引发信号的细胞质Toll-白细胞介素-1受体同源(TIR)结构域。TLR识别细菌、真菌、寄生虫和含核酸病毒中非常不同的微生物成分。尽管通常存在于质膜中以检测细胞外的PAMP，但是包括TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的少量TLR识别细胞内部分(例如核内体)的配体。后者中的TLR共有核酸识别能力，以检测dsRNA(双链RNA)(TLR3)、ssRNA(单链RNA)(小鼠中的TLR7，人体中的TLR8)和非甲基化CpG DNA基序(TLR9)。