[发明专利]吞噬细胞的功能评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于吞噬细胞功能评价的新方法、与吞噬细胞引起的吞噬相关联的疾病的检测方法。

背景技术

吞噬细胞是具有吞噬活性的细胞的总称。大致分为在生物体内主要发挥吞噬作用的嗜中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞之类的专职吞噬细胞(professional phagocyte)和根据情况发挥吞噬活性的非专职吞噬细胞(amateur phagocyte)。非专职吞噬细胞包括脑的小胶质细胞、肝脏的枯否氏细胞、精巢的塞尔托利细胞等。

白细胞是指血液中包含的细胞成分，主要由粒细胞(约60％)、淋巴细胞(约25％)、单核细胞(约5％)构成。粒细胞进一步分类为嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，数量上嗜中性粒细胞最多，嗜中性粒细胞占白细胞的几乎一半。另外，单核细胞在各组织中游走成为巨噬细胞。白细胞包含大量的吞噬细胞，因为分离容易，所以适合用作吞噬细胞源。

吞噬是针对细菌·真菌等微生物的进入而最早启动的重要生物体防御机制之一。吞噬经过吞噬细胞引起的异物的识别、异物的摄入、吞噬体的形成、吞噬体内的异物消化、消化后的物质的吸收或排出这样连续的阶段。吞噬不仅针对细菌·真菌等外来异物而发生，也与炎症部位的自身组织残渣或代谢的自身细胞之类来自自身的无用物质的除去有关。吞噬细胞不只是将吞噬的物质在细胞内消化，有时也随着吞噬，将活性氧或蛋白质分解酶释放到细胞外。由此能够在局部有效地杀菌或组织消化，另一方面，有时自身组织也会被过度的吞噬反应破坏。例如在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis：RA)的病变部确认了过度吞噬自身免疫复合体的细胞(RA细胞)，已知由RA细胞释放出的蛋白质分解酶破坏组织，参与关节炎的进行。

作为测定吞噬细胞的吞噬功能的方法，已知下述方法：使吞噬细胞与胶乳粒子接触，通过血细胞计数器或显微镜计数被摄入细胞内的胶乳粒子的方法；使吞噬细胞吞噬施加了荧光标记的吞噬物质(大肠杆菌、酵母聚糖等)，检测被摄入细胞内的量的方法；使其吞噬活菌，然后通过培养确认残留的活菌数的方法；检测吞噬时释放的活性氧引起的发光的方法等。

已知CD14分子是被鉴定为在单核细胞的膜上表达的分化标记物之一的糖蛋白质，具有作为LPS(脂多糖)的受体的功能(非专利文献1)。CD14分子中存在表达于细胞表面的膜结合型CD14(mCD14)和可溶型CD14(sCD14)2种。作为sCD14，已知具有约55kDa、约49kDa分子量的分子种类的存在，认为是随着由肝脏的分泌和单核细胞的活化mCD14被酶切断而产生的(非专利文献2～4)。

报道了下述情况，即分子量约55kDa和约49kDa的sCD14(以下称为“高分子量sCD14”)在败血症(SEPSIS)、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、全身性红斑狼疮(SLE)等多种疾病的患者血中显示高值。因此，认为上述sCD14不是疾病特异性的标记物(非专利文献5～6)。

另一方面，作为在败血症患者中血中浓度特征性上升的、新sCD14的分子种类，报道了存在sCD14-ST(可溶性CD14抗原亚型)。

sCD14-ST特征为在sCD14中于非还原条件下在SDS-PAGE中泳动至分子量13±2kDa，且保持CD14的N端部。与高分子量sCD14相比，具有C端侧大量缺失的氨基酸序列，与高分子量sCD14不同，不具有LPS结合能力。另外，因为sCD14-ST显示与高分子量sCD14不同的免疫原性，所以可以使用抗体区分两者。sCD14-ST在败血症患者中血中浓度特异性上升(专利文献1)。另外，有报告称即使与难以与败血症相区分的、显示全身性炎症反应(SIRS)的患者进行比较，在败血症患者的血中也显示高值，认为sCD14-ST是败血症的特异性诊断标记物(非专利文献7)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO2005/108429号公报

非专利文献

非专利文献1：Wright等，Science，249：1431-1433，1990年

非专利文献2：Bazil及Strominger，Journal of Immunology，147：1567-1574，1991年

非专利文献3：Bufler等，European Journal of Immunology，25：604-610，1995年