[发明专利]用于生物质发酵的改良的运动发酵单胞菌菌株

权利要求书

1.制备更耐受抑制剂的运动发酵单胞菌菌株的方法，包括：

(a)在基本上无抑制剂的培养基中生长运动发酵单胞菌菌株；

(b)在浓度连续升高的所述抑制剂存在下逐步培养所述运动发酵单胞菌菌株；及

(c)分离适应于升高的抑制剂浓度的突变菌株。

2.权利要求1的方法，其中所述抑制剂是：乙酸、甲酸、2-糠醛、2-糠酸、香兰素、羟基苯甲酸、乙醇或它们的混合物。

3.权利要求1的方法，

·其中所述抑制剂包括乙酸；及

·其中所述分离的运动发酵单胞菌突变菌株的特征在于基本上表现出下列特征中的一个或多个：

(1)延迟期短于约1天；或

(2)比生长速率为至少约0.15h^-1；或

(3)乙醇产率为理论产率的至少约95％；

其中所述一个或多个特征是在有50g/L葡萄糖及1.6％乙酸浓度的RM培养基中以pH约6发酵时表现出的。

4.权利要求1的方法，其还包括：

(a)在适宜培养基中生长运动发酵单胞菌菌株；

(b)在pH连续降低的培养基中逐步培养所述运动发酵单胞菌菌株；及

(c)分离适应于降低的pH的突变菌株。

5.制备能增加碳水化合物发酵的运动发酵单胞菌菌株的方法，所述碳水化合物是选自木糖、阿拉伯糖、甘露糖及它们的混合物的一种或多种碳水化合物，所述方法包括：

(a)在含葡萄糖的培养基中生长运动发酵单胞菌原菌株；

(b)在浓度连续升高的选自木糖、阿拉伯糖、甘露糖及它们的混合物的一种或多种碳水化合物及量连续降低的葡萄糖存在下逐步培养所述运动发酵单胞菌菌株；及

(c)分离能增加碳水化合物发酵的突变菌株，所述碳水化合物是选自木糖、阿拉伯糖、甘露糖及它们的混合物的一种或多种碳水化合物。

6.权利要求5的方法，其还在步骤(a)之前包括：将不能发酵木糖的运动发酵单胞菌菌株基因修饰为能发酵木糖的运动发酵单胞菌原菌株。

7.权利要求5的方法，其中所述分离的运动发酵单胞菌突变菌株的特征在于基本上表现出下列特征中的一个或多个：

(1)乙醇产率为理论产率的至少约85％；或

(2)容积乙醇产力为至少约0.5g乙醇/l反应器/小时；或

(3)比乙醇产力为至少约0.9g乙醇/g干细胞团/小时；或

(4)木糖消耗速率为至少约1.8g木糖/g干细胞团/小时；或

(5)短于约40小时内消耗5％(w/v)木糖的能力；

其中所述一个或多个特征是在有50g/L木糖、无葡萄糖的RM培养基中发酵时表现出的。

8.权利要求1或5的方法，其还包括在所述适应的突变菌株存在下发酵碳水化合物，其中所述碳水化合物源自生物质，或是生物质的一部分。

9.权利要求1或5的方法，其还包括基于生长速率、细胞团浓度、乙醇产率或它们的组合筛选所述分离的突变菌株。

10.权利要求1或5的方法，其中所述逐步培养持续至所述分离的突变体的生长速率、细胞团浓度、乙醇产率、或它们的组合稳定。

11.非天然、生物学纯的运动发酵单胞菌突变菌株，其特征在于，基本上表现出下列特征中的一个或多个：

(1)延迟期短于约1天；或

(2)比生长速率为至少约0.15h^-1；或

(3)乙醇产率为理论产率的至少约95％；

(4)乙醇产率为理论产率的至少约85％；或

(5)容积乙醇产力为至少约0.5g乙醇/l反应器/小时；或

(6)比乙醇产力为至少约0.9g乙醇/g干细胞团/小时；或

(7)木糖消耗速率为至少约1.8g木糖/g干细胞团/小时；或

(8)短于约40小时内消耗5％(w/v)木糖的能力；

·其中所述一个或多个特征(1)～(3)是在有50g/L葡萄糖及1.6％乙酸浓度的RM培养基中以pH约6发酵时表现出的，及

·其中所述一个或多个特征(4)～(8)是在有50g/L木糖、无葡萄糖的RM培养基中发酵时表现出的。

12.权利要求11的菌株，其中所述菌株基本上表现出所述特征中的至少2个或多个。