[发明专利]诱导性多能干(iPS)细胞的产生

权利要求书

1.一种产生诱导性多能干(iPS)细胞的方法，所述方法包括将一段或两段编码序列导入靶细胞的步骤，每段所述编码序列在转录时会产生有助于将所述靶细胞重编程为诱导性多能干细胞的选自Oct3/4的因子或者属于Myc、Klf和Sox因子家族的因子，其中，所述靶细胞内源性地表达至少不由待导入的所述编码序列所编码的选自Oct3/4的因子或属于Myc、Klf和Sox因子家族的因子，且其中因所述一段或两段编码序列的导入而产生的细胞表达因子Oct3/4与选自Myc、Klf和Sox的每个因子家族的至少一种因子的组合。

2.如权利要求1所述的方法，其中属于Myc、Klf和Sox因子家族的、且被内源性表达或被待导入靶细胞的编码序列所编码的所述因子选自由l-Myc、n-Myc、c-Myc、Klf1、Klf2、Klf4、Klf15、Sox1、Sox2、Sox3、Sox15和Sox18组成的组。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述靶细胞不内源性地表达由待导入所述靶细胞的所述一段或两段编码序列所编码的因子。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是专能干细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述专能干细胞是外胚层细胞。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是神经干细胞(NSC)。

7.如权利要求6所述的方法，其中待导入的所述编码序列编码因子Oct3/4。

8.如权利要求6所述的方法，其中待导入的所述两段编码序列编码因子Oct3/4和c-Myc或者Oct3/4和Klf4。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述靶细胞内源性地表达因子c-Myc、Klf4和Sox2。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述靶细胞内源性地表达因子c-Myc、Klf4和Sox2，且与所述靶细胞同属的胚胎干细胞中的相应表达水平相比，所述表达的表达水平比其低最低10倍或高出最高10倍。

11.如权利要求7～10中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是小鼠神经干细胞。

12.一种诱导性多能干细胞，其由权利要求1～11中任一项所述的方法产生。

13.一种化合物的鉴定方法，所述化合物有助于将靶细胞重编程为诱导性多能干细胞，所述方法包括如下步骤：

(a)根据权利要求1～11中任一项所述的方法重编程靶细胞，其中用待测化合物代替一段待导入的编码序列；和

(b)评估在待测化合物存在和不存在的情况下是否形成诱导性多能干细胞，

其中从已导入所述待测化合物的靶细胞形成诱导性多能干细胞表明所述化合物有助于将靶细胞重编程为诱导性多能干细胞。

14.一种产生转基因非人类动物的方法，所述方法包括如下步骤：

(a)将诱导性多能干细胞导入非人类的植入前胚胎，所述诱导性多能干细胞由权利要求1～11中任一项或权利要求12所述的方法产生；

(b)将步骤(a)中的胚胎转移至雌性非人类动物子宫中；和

(c)让所述胚胎发育及出生。

15.一种转基因非人类动物，其由权利要求14所述的方法产生。

16.一种含有诱导性多能干细胞的组合物，所述诱导性多能干细胞由权利要求1～11中任一项所述的方法产生，所述组合物用于基因疗法、再生医学、细胞疗法或药物筛选。