[发明专利]指导生物体进化的方法

权利要求书

1.一种指导细胞进化的方法，包括至少将一个增变基因导入所述细胞，其特征在于，至少一个所述增变基因包括低保真度突变和核酸外切酶缺失突变，所述至少一个增变基因的导入增加了所述细胞的突变率；培养至少有一个所述增变基因导入的所述细胞，以便获得成熟细胞；并从所述成熟细胞中至少挑选出一个带有所需遗传性状的突变细胞，以便获得选择性细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少将一个增变基因导入所述细胞中，而不干扰细胞内源性DNA聚合酶基因。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少将一个增变基因导入带有突变载体的细胞中。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：回复所述成熟细胞的野生型突变率，以便获得回复的成熟细胞，其中，从所述回复的成熟细胞中，至少挑选出一个带有所需遗传性状的突变细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：回复所述被挑选出的细胞的野生型突变率。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少一个所述增变基因为异源性DNA聚合酶。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少一个所述增变基因包含带有低保真度突变体的第一DNA聚合酶增变基因和带有核酸外切酶缺失突变体的第二DNA聚合酶增变基因。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少一个所述增变基因是所述细胞的内源性DNA聚合酶的突变拷贝。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少一个所述DNA聚合酶包含：B族DNA聚合酶，Exo I模体突变体、Exo II模体突变体和Exo III模体突变体中的至少一个；以及模体A突变体和模体B突变体中的至少一个。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，至少一个所述增变基因是至少具有一个DNA聚合酶δ的所述细胞DNA聚合酶。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞是从真核细胞、哺乳动物细胞、酵母菌细胞、植物细胞和原核细胞中挑选出来的。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所需生长条件下培养所述细胞，其中从有机溶剂、卤化物、芳香族化合物、温度、盐浓度、pH环境、独有的生物条件以及高的/低的种群密度中至少挑选出来一种作为所述所需生长条件。

13.一种带有所需遗传性状的细胞，其特征在于，所述细胞是根据权利要求1所述方法获得的细胞或其后代。

14.根据权利要求12所述的细胞，其特征在于，至少回复一个所述细胞的野生型突变率。

15.一种至少为指导酵母菌细胞进化的方法，包括至少将一个增变基因导入所述酵母菌细胞，其特征在于，至少一个所述增变基因包括低保真度突变和核酸外切酶缺失突变；其中，所述至少一个增变基因的导入增加了所述酵母菌细胞的突变率；至少一个所述增变基因的导入不会使所述酵母菌细胞的内源性基因组DNA聚合酶分裂；

培养至少有一个所述增变基因导入的所述酵母菌细胞，以便获得成熟酵母菌细胞；并从所述成熟酵母菌细胞中至少挑选出一个带有所需遗传性状的突变酵母菌细胞，以便获得选择性酵母菌细胞。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述核酸外切酶缺失突变包含所述酵母菌细胞的DNA聚合酶δ基因(POL3)的催化亚基的D321A(在氨基酸321位点上，丙氨酸替代天冬氨酸)氨基酸替换和E323A(在氨基酸323位点上，丙氨酸替代谷氨基酸)氨基酸替换。

17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述低保真度突变包含在至少一个所述酵母菌细胞的DNA聚合酶δ基因(POL3)的催化亚基中的L612M(在氨基酸612位点上，蛋氨酸替换亮氨酸)氨基酸替换。

18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，进一步包括：回复成熟酵母菌细胞的野生型突变率，以便获得回复的成熟酵母菌细胞；其中从所述回复的成熟酵母菌细胞中，至少挑选出一个带有所需遗传性状的突变酵母菌细胞。

19.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，进一步包括：回复所述被挑选出的酵母菌细胞的野生型突变率。