[发明专利]大麻使用的检测

说明书

发明领域

本发明提供了增强用于检测大麻使用的免疫测定的方法。特别地，本发明涉及结合伴侣，尤其是能够结合四氢大麻酚(THC)和抗-THC-抗体之间的免疫复合物的抗体片段。本发明还涉及包含该结合伴侣的测试试剂盒，以及所述结合伴侣用于检测大麻使用的用途。此外，本发明涉及免疫测定，其中使用了所述结合伴侣。再进一步，本发明涉及编码所述结合伴侣的多核苷酸，和能够表达该多核苷酸的宿主细胞。

本发明的技术背景

药物滥用是个严重的威胁，尤其是对交通安全，并且因此已经研发了各种试验用于方便地测试滥用的药物。这些测试中的许多是免疫测定，并且大部分是竞争性免疫测定，其特异性通常低于非竞争性的免疫测定。Kerrigan和Phillips已经例如比较了12个可购得的ELISA(酶联免疫吸附测定)，这些ELISA用于全血和尿液中的鸦片、脱氧麻黄碱、古柯碱代谢产物、苯环己哌啶和大麻素(Kerrigan S.，&Phillips，W.，2001 Clinical Chemistry 47(3)：540-547)。测试形式是竞争性免疫测定，并且结果并不完全令人满意，产生了一些假的结果和不利的交叉反应性。

不仅可以从血液或尿液，而且可以从唾液测定药物滥用，这是选择用于路边测试的测试基质。Lo Muzio等测试了用于检测尿液中药物的商业快速免疫筛选，并比较了两种生物基质：非常规的生物基质，唾液，和传统的生物基质，尿液。他们发现唾液样本在用于大麻、THC、苯化重氮和三环抗抑郁药的免疫学试验中是阴性的，尽管气相色谱-质谱(GC-MS)分析揭示了其的低浓度，并且推断在与唾液一起使用之前，必须改进测试试剂盒(Lo Muzio L.等，2005，Int J ImmunopatholPharmacol.18(3)：567-573)。

WO 2004/046733公开了用于测定小分析物，如滥用的药物的非竞争性免疫测定。该测定使用了分析物特异性的一级抗体，一级抗体和分析物之间的免疫复合物(IC)特异性的二级抗体和分析物，以提高测定的灵敏性和特异性。所用的抗-IC抗体通过下列方法获自天然人抗体片段噬菌体展示文库：用结合的一级抗体预培养展示噬菌体来挑选结合一级抗体本身的那些，然后分离未结合的噬菌体并用分析物和固定的一级抗体的混合物培养以选择结合固定的一级抗体和分析物之间形成的免疫复合物但不结合抗体本身的噬菌体。对于确定唾液中的吗啡，获得了非常好的结果。

Δ9-四氢大麻酚(Δ9-THC)是大麻的母体药物，并且其快速代谢成可以在尿液中确定的11-nor-Δ9-THC-COOH或11-OH-Δ9-THC。因此，优选通过测定唾液中的Δ9-THC来检测大麻的使用，这是比当在尿液中检测该代谢产物时更好的最近使用的指示。然而，已经发现对于这种分析物难以研发出快速测试，并且市场上的测试试剂盒还不够灵敏。

US 6,326,159和Ullman等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.90：1184-1189描述了使用用于增强一级抗体的亲和性和特异性的抗-IC-抗体的免疫测定。在这些论文中，已经研发了第二种抗-IC抗体，其结合与分析物相结合的第一种抗分析物抗体，但是其不结合单独的一级抗体或分析物。公开了识别抗体与四氢大麻酚(THC)的免疫复合物的抗体。通过以下方法获得抗-IC抗体：使用亲和性标记的抗-THC抗体作为免疫原并选择其结合通过Δ9THC的存在而增强的抗-IC抗体。观察到与例如THC-代谢产物的一些交叉反应性，这在法医药物分析中是不利的。通过常规杂交瘤技术制备了抗体，这使得它们太大，以致不能应用于同源性免疫测定中。

Kintz P.等测试了用于测试唾液中药物的商业药物装置，并将结果与GC-MC分析结果相比较，并且发现该测试装置鉴定出只有一位暴露于THC的驾驶员，而18位驾驶员使用GC-MC被测试为阳性的。他们推断目前使用这种样本用于路边测试的局限在于缺少检测足够低浓度的母体化合物(THC)的合适免疫测定(Kintz P.等，2005.J.Anal.Toxicol.29(7)：724-727)。

目前用于确定大麻使用的免疫测定不令人满意，大概是由于低特异性和灵敏度。因此，仍然需要容易、快速和可靠的用于大麻使用的药物测试，其可以用于，例如，路边测试，并优选用于分析口腔流体样本，这是非入侵性的、易于进行，并可以在严密监督下进行。本发明满足了这些需求中的至少一部分。

发明概述