[发明专利]从发酵液中回收不溶解酶和不溶解酶的制剂

权利要求书

1.一种用于从含有微生物细胞和/或来自微生物细胞的细胞碎片的微生物发酵液中回收不溶解酶的方法，所述方法包括从微生物发酵液中回收不溶解酶而不去除微生物细胞和/或细胞碎片，从而制备了含有回收的不溶解酶和微生物细胞和/或细胞碎片的组合物，其中至少一些酶在微生物发酵液中是不溶解的。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述微生物发酵液通过选自下列的方法制备：

将酶与含有微生物细胞和/或细胞碎片的微生物发酵液混合，其中所述的酶不是所述微生物细胞产生的，且其中所述的酶在所述的微生物发酵液中是不溶解的，或者其中所述的酶在所述微生物发酵液中是可溶的，且所述方法另外包括通过加入沉淀剂使得至少一些所述的酶不溶解；

将沉淀剂加入含有所述微生物细胞表达的可溶的酶的微生物发酵液中，因而引起至少一些酶变得不溶解；和

在发酵培养基中的微生物细胞中表达酶，其中至少一些酶在发酵培养基中是不溶解的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述回收包括至少一种选自发酵液预处理、细胞裂解、匀浆化、渗滤和固体-液体分离的回收操作，

其中当所述回收包括两种或两种以上进行的所述回收操作时，所述回收操作可以以任何顺序进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述回收包括从微生物发酵液中去除至少部分液相。

5.根据权利要求4所述的方法，其中从微生物发酵液中去除至少部分液相的操作包括浓缩微生物发酵液。

6.根据权利要求5所述的方法，其中浓缩微生物发酵液包括选自超滤、微量过滤、反向渗透和纳米过滤的膜过滤方法。

7.根据权利要求4所述的方法，其中从微生物发酵液中去除至少部分液相包括选自旋转真空过滤、板框过滤、带过滤、离心、旋风分离、滗析或蒸发的方法。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述不溶解酶通过将沉淀剂加入含有可溶的酶的微生物发酵液中，因而使得至少一些酶在微生物发酵液中不溶解而制备，其中沉淀剂选自调整pH、调整温度、加入盐、加入酸、加入碱、加入至少一种其它的蛋白质，加入缓冲液或加入聚合电解质或其组合。

9.根据权利要求1所述的方法，其中包含回收的不溶解酶的该组合物含有完整微生物细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其中完整的微生物细胞是活的微生物细胞。

11.根据权利要求9所述的方法，其中完整的微生物细胞是死的微生物细胞。

12.根据权利要求1所述的方法，其中含有微生物细胞和/或细胞碎片的所述微生物发酵液含有微生物细胞裂解液，其中所述微生物细胞裂解液通过破坏微生物细胞膜制备。

13.根据权利要求9所述的方法，其中所述方法另外包括破坏完整微生物细胞的微生物细胞膜，从而制备含有回收的不溶解酶的微生物细胞裂解液。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中破坏微生物细胞膜包括将微生物细胞与能够裂解微生物细胞的酶接触。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述能够裂解微生物细胞的酶是溶菌酶。

16.根据权利要求12或13任一项所述的方法，其中破坏微生物细胞膜包括选自匀浆化、高剪切混合、压力挤压或高剪切泵送的机械剪切方法。

17.根据权利要求12或13任一项所述的方法，另外包括将微生物细胞裂解液匀浆，从而制备匀浆的微生物细胞裂解液。

18.根据权利要求17所述的方法，另外包括渗滤微生物细胞裂解液。

19.根据权利要求1所述的方法，其中微生物细胞是细菌细胞。

20.根据权利要求19所述的方法，其中细菌细胞是芽孢杆菌细胞。

21.根据权利要求20所述的方法，其中芽孢杆菌细胞是枯草芽孢杆菌或地衣芽胞杆菌的细胞。

22.根据权利要求1所述的方法，其中微生物细胞是真菌细胞。

23.根据权利要求22所述的方法，其中真菌细胞是木霉属细胞。

24.根据权利要求23所述的方法，其中木霉属细胞是瑞氏木霉的细胞。