[发明专利]使用重组微生物制造共聚聚酯的方法

权利要求书

1.一种由3-羟基丁酸和乳酸形成的共聚聚酯的制造方法，其包括下述工序(1)和工序(2)，

工序(1)：在含碳源的培养基中培养具有催化向丙酸和/或乳酸转移CoA的反应的蛋白质、催化由2分子乙酰CoA形成乙酰乙酰CoA的反应的蛋白质、催化乙酰乙酰CoA的还原反应的蛋白质、以及包含下述(a)或(b)的氨基酸序列的催化聚羟基脂肪酸酯的合成反应的蛋白质的重组微生物，

(a)序列号2所示氨基酸序列的第130位、第325位、第477位和第481位氨基酸的至少1个以上被置换成了其它氨基酸的氨基酸序列，

(b)在(a)所定义的蛋白质中，进而除第130位、第325位、第477位和第481位以外的至少1个以上氨基酸缺失或被置换，或者插入了1个以上氨基酸残基的氨基酸序列；

工序(2)：从工序(1)的培养物中回收上述共聚聚酯。

2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，催化向丙酸和/或乳酸转移CoA的反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号4所示氨基酸序列，或者在序列号4所示氨基酸序列中缺失、置换或添加了1个或几个氨基酸的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的制造方法，其中，催化由2分子乙酰CoA形成乙酰乙酰CoA的反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号6所示氨基酸序列，或者在序列号6所示氨基酸序列中缺失、置换或添加了1个或几个氨基酸的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的制造方法，其中，催化乙酰乙酰CoA的还原反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号8所示氨基酸序列，或者在序列号8所示氨基酸序列中缺失、置换或添加了1个或几个氨基酸的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的制造方法，其中，催化聚羟基脂肪酸酯的合成反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号2所示氨基酸序列的第325位和第481位的氨基酸分别被置换成了其它氨基酸的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的制造方法，其中，催化聚羟基脂肪酸酯的合成反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号2所示氨基酸序列的第325位和第481位的氨基酸同时被置换了的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的制造方法，其中，催化聚羟基脂肪酸酯的合成反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号2所示氨基酸序列的第325位的Ser被置换成了Thr、第481位的Gln被置换成了Lys的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述蛋白质都是由被导入微生物中的重组表达载体所编码的蛋白质。

9.根据权利要求1～8的任一项所述的制造方法，其中，重组微生物的培养在厌氧条件下进行。

10.根据权利要求1～9的任一项所述的制造方法，其中，微生物是具有乳酸蓄积能力的微生物。

11.根据权利要求10所述的制造方法，其中，具有高乳酸蓄积能力的微生物是大肠杆菌Jw2293菌株、Jw0885菌株或Jw0886菌株。

12.一种包含3-羟基丁酸和乳酸的共聚聚酯的制造方法，其包括下述工序(1)和工序(2)，

工序(1)：在含有除3-羟基丁酸和乳酸以外的羟基脂肪酸和碳源的培养基中培养具有催化向丙酸和/或乳酸转移CoA的反应的蛋白质、催化由2分子乙酰CoA形成乙酰乙酰CoA的反应的蛋白质、催化乙酰乙酰CoA的还原反应的蛋白质、和包含下述(a)或(b)的氨基酸序列的催化聚羟基脂肪酸酯的合成反应的蛋白质的重组微生物，

(a)序列号2所示氨基酸序列的第130位、第325位、第477位和第481位的氨基酸的至少1个以上被置换成了其它氨基酸的氨基酸序列，

(b)在(a)所定义的蛋白质中，进而除第130位、第325位、第477位和第481位以外的至少1个以上氨基酸缺失或被置换，或者插入了1个以上氨基酸残基的氨基酸序列；

工序(2)：从工序(1)的培养物中回收上述共聚聚酯。

13.根据权利要求12所述的制造方法，其中，催化向丙酸和/或乳酸转移CoA的反应的蛋白质的氨基酸序列，是序列号4所示氨基酸序列，或者在序列号4所示氨基酸序列中缺失、置换或添加了1个或几个氨基酸的氨基酸序列。