[发明专利]样品分离吸附器具有效
申请号: | 200980123986.9 | 申请日: | 2009-06-01 |
公开(公告)号: | CN102077084A | 公开(公告)日: | 2011-05-25 |
发明(设计)人: | 绿川宇一;松永贵辉;丸尾祐二;鹈沼丰;平塚淳典;木下英树;横山宪二 | 申请(专利权)人: | 夏普株式会社 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 张远 |
地址: | 日本国*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 样品 分离 吸附 器具 | ||
技术领域
本发明涉及将混合多个成分的生物学或化学的样品分离为各成分,并使其吸附于吸附构件的样品分离吸附器具。
背景技术
目前,开发将蛋白质或核酸等试料根据其性质的不同进行分离检测的各种方法手法,并开发用于此的装置。作为分离方法,具有凝胶(ゲル)电泳、毛细管电泳、液体色谱法等,从其简单度及分离能的高度出发,广泛利用凝胶电泳。
凝胶电泳具有只向1方向分离试料的电泳、及向两个方向分离试料的二维电泳。二维电泳通常在分析蛋白质的情况下进行。
在通过二维电泳分离蛋白质的情况下,对向第一维方向的分离利用使用具有一定的pH梯度的凝胶带(ゲルストリツプ)的等电聚焦电泳(等電点電気泳動)。等电聚焦电泳为在凝胶带的两端施加电压,通过具有蛋白质的固有的等电点的不同进行分离的方法。另外,对向第二维方向的分离广泛利用使用阴离子界面活性剂即十二烷基硫酸钠(SDS)的SDS-聚丙烯酸酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。二维电泳因为可以一次分离较多的蛋白质,包罗地进行解析,所以,在蛋白质组(プロテオ一ム)解析中广泛利用。蛋白质组指在特定的细胞、器官、脏器等中进行翻译生产的蛋白质(protein)的整体,作为其研究可以列举蛋白质的轮廓、功能解析等。
另外,可知,在生物体内合成的蛋白质通过接受称为磷酸化等翻译后修饰的化学性修饰,调节其功能。上述的电泳只能将蛋白质分离为各成分,只分离解析难以得到关于各成分的翻译后修饰的信息。
在蛋白质组解析中,作为检测通过电泳分离的蛋白质的试料的方法,具有称为使转印膜吸附凝胶中的分离的试料进行固定化的转印(免疫印迹)的方法。转印膜使用易于结合试料、且疏水性高的硝化纤维素膜或PVDF(Polyvinylidenedifluoride)膜等。
转印到膜的试料使用进行了荧光标识的抗体或探头等进行检测。使用抗体检测蛋白质的方法已知蛋白免疫印迹法(ウエスタンブロツテイング)。若在转印了蛋白质的膜上覆盖特定的抗体,则基于抗原抗体反应可以一定程度指定蛋白质。在生物学上,对于重要的翻译后修饰的磷酸化,可以通过在蛋白质转印后的膜上覆盖抗磷酸化抗体,而检测磷酸化蛋白质的有无、磷酸化部位的差异等。
这样,电泳和蛋白免疫印迹法的组合为在蛋白质组解析非常有效的方法(例如,参照非专利文献1)。
目前,电泳法及蛋白免疫印迹法使用分别独立的装置通过研究者的手工作业进行。即,通常为,在电泳装置进行SDS-PAGE后,将凝胶从装置取出移至转印(免疫印迹)装置,放置转印膜进行转印(免疫印迹)。该操作因为凝胶为非常软的材料难以处理,所以,为操作繁杂且需要熟练的工作,但是存在使这些工作自动化的技术(专利文献1)。专利文献1公开有使从电泳到蛋白免疫印迹的一连串的操作自动化的技术。
专利文献1:日本国公开专利公报“特开2007-292616号公报(公开日:平成19年11月8日)”
非专利文献1:修订第三版蛋白质试验笔记(下):从分离同定到功能解析(羊土社、2005年、第38~47页)
使用于蛋白质组解析的蛋白质、以及使用于免疫反应的抗体等的、用于解析的样品,通常较多情况下从细胞或组织分离或抽出较为麻烦。因此,即使在用于连续进行从电泳到蛋白免疫印迹的一连串的操作的样品分离吸附器具,也需求使样品更有价值更高效地转印的技术。
发明内容
本发明鉴于上述课题,其主要目的为提供一种可以使样品效率地转印的样品分离吸附器具。
本发明者们锐意探讨的结果为,发现在专利文献1的技术中,(a)在缓冲溶液内进行样品的转印(免疫印迹),在样品转印中缓冲液容易流入样品分离部和样品吸附构件的缝隙,因为在流入的缓冲溶液中样品通过自扩散流出,所以,降低样品的转印效率、及(b)在进行电泳及转印(免疫印迹)时,若由于电化学反应从电极产生的气泡在样品转印中与样品吸附构件接触,则在该部分不流过电流,因此产生不进行转印的部分,在转印图案产生斑点状的不均,在通过进一步反复探讨,完成本发明。
即,为解决上述课题,本发明提供一种样品分离吸附器具,其特征在于,具备,第一缓冲液槽,其具备第一电极,用于加入第一缓冲液;第二缓冲液槽,其具备第二电极,用于加入第二缓冲液;样品分离部,其收纳分离样品的样品分离介质;导电部,其收纳导电介质,在通过该样品分离介质和该导电介质夹持的位置搭载吸附该样品的样品吸附构件,在该位置搭载该样品吸附构件时,该样品分离介质及该导电介质分别与该样品吸附构件相接,与该样品吸附构件相接的一侧的相反侧的该样品分离介质连接于第一缓冲液槽内,与该样品吸附构件相接的一侧的相反侧的该导电介质连接于第二缓冲液槽内。
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