[发明专利]用于结合测定的多孔性固相和使用所述多孔性固相的结合测定法

说明书

技术领域

本发明涉及改进的用于结合测定的多孔性固相，其防止与结合测定法相关的测试样品的流动行进不良，灵敏度差和测量波形中的扰动的问题，在所述结合测定法中多孔性固相(例如，膜)用于检测测试样品组分。本发明还涉及使用所述多孔性固相的结合测定法。更具体地，本发明提供了一种用于结合测定的多孔性固相(结合测定用多孔性固相)，在所述多孔性固相中在加入测试样品之前已经结合了至少一种表面活性剂，所述至少一种表面活性剂选自由下列各项组成的组：(A)含糖表面活性剂，其包含由通式(I)显示的化合物，(B)含糖表面活性剂，其包含蔗糖脂肪酸酯，其中构成脂肪酸具有5-14个碳原子，和(C)类固醇表面活性剂，以及使用所述结合测定用多孔性固相的结合测定法。

背景技术

当进行使用多孔性固相(例如，膜)检测测试样品组分的结合测定(例如，免疫色谱法)时，可能由于各种原因发生多孔性固相中测试样品的流动行进(flow progression)不良。例如，当测试样品含有大于多孔性固相的孔隙的物质(例如，血细胞)并且因此不能容易地通过多孔性固相的孔隙移动和/或经过时，或当已经溶解在测试样品中的组分在测定期间变得不可溶并且堵塞所述多孔性固相时，可能发生测试样品的流动行进不良。分析物、游离的标记抗体，和分析物与标记抗体的复合物，以及包含在测试样品中并且可能与检测试剂的标志物质具有类似活性的其他物质(例如，氧化酶)，在正常情况下它们预期均能全部自由地通过多孔性固相移动/经过，而在这些情况下，它们可能停止通过所述多孔性固相移动/经过并且可能停留在多孔性固相中不合乎需要的位置中。结果，可能丢失正常情况下与分析物的存在相关的预期信号强度，使得检测变得困难(使得不可能进行测定或导致假阴性结果)，或可能发生干扰信号检测的非特异性反应(使得不可能进行测定或导致假阳性结果)，使得测试的可靠性或再现性可能下降。

常规地，已经通过在将测试样品施加到多孔性固相之前，通过在特定条件下离心或过滤或经由沉淀、吸附或类似方法去除包含在测试样品中的杂质(例如，比多孔性固相的孔隙大的物质(例如，血细胞)或容易变得不溶的组分)来防止多孔性固相的堵塞。然而，上述操作的每一种均是耗时的，并且在操作期间测试样品的损失是不可避免的。而且，这些操作需要额外的成本。如果测试样品含有感染性病原微生物，进行测试的人(例如，医生或研究人员)可能遭受感染的高风险。

包括将表面活性剂加入至温育媒介中的方法(例如，专利文件1)已经被广泛地用于防止结合测定期间的非特异性干扰。然而，取决于加入的表面活性剂的类型，与固相载体结合的俘获试剂(例如，抗体)可能从载体上被去除，或固相载体和抗体之间的结合反应可能首先被妨碍，使得特异性信号可能大幅减少并且可能不能达到所需的检测灵敏度。此外，当上述方法应用于利用多孔性固相的结合测定中时，即使表面活性剂(例如，专利文件1中公开的葡糖苷表面活性剂)不影响检测灵敏度本身，但测定系统中测试样品组分的绝对量可能由于测试样品的稀释而减少，使得可能不能有效地确保所需的检测灵敏度。此外，专利文件1仅针对防止非特异性干扰。在专利文件1中，没有提到而且也没有提示测试样品的流动行进不良，并且因此没有将其作为待解决的课题而认识到。

在其中全血用作测试样品的免疫测定中，如果血细胞分离垫设置在结合测定条(strip)上的全血负载区域和多孔性固相(膜)之间，则采用离心对测试样品的预处理可以被省略。根据此方法，血细胞组分保留在分离垫中，并且防止其在短时期内流入至多孔性固相中，同时允许血浆组分在血细胞组分之前流入至免疫色谱膜中；因此，该测定不受血细胞组分的存在的影响。

然而，即使在这种情况下，由于除由杂质的尺寸所导致的堵塞以外的原因仍然可能发生样品流动行进(移动或经过)不良。这些其他的原因的实例包括测试样品的高粘度，和测定期间多孔性固相的干燥。高粘度测试样品(例如，含有大量固体组分诸如血细胞或大量蛋白的测试样品，或由于蒸发导致失水的测试样品)固有地具有差的流动性并且因此花费长时间在多孔性固相中行进，导致不均一的行进并缺少测定再现性。