[发明专利]血管瘤集落形成细胞和非移植血管瘤细胞

权利要求书

1.一种体外产生和扩增人类血管瘤集落形成细胞的方法，所述方法包括步骤：

(a)在存在至少一种足够将多能干细胞诱导分化成胚状体的量的生长因子的情况下，在无血清培养基中培养包含所述多能干细胞的细胞培养物；和

(b)向所述含胚状体的培养物中加入至少两种生长因子，并继续在无血清培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人类血管瘤集落形成细胞在所述胚状体培养物中扩增；

其中在所述方法步骤(a)和(b)的整个过程中使所述干细胞、胚状体和血管瘤集落形成细胞在无血清培养基中生长，

其中在步骤(b)中所述的至少两种生长因子包括BMP4和VEGF。

2.一种体外产生和扩增人类血管瘤集落形成细胞的方法，所述方法包括步骤：

(a)在存在至少一种足够将多能干细胞诱导分化成胚状体的量的生长因子的情况下，在无血清培养基中培养包含所述多能干细胞的细胞培养物；和

(b)向所述含胚状体的培养物中加入至少两种生长因子，并继续在无血清培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人类血管瘤集落形成细胞在所述胚状体培养物中扩增；

(c)将所述胚状体解聚为单细胞；

(d)向所述含所述单细胞的培养物中加入至少一种生长因子，并继续在无血清培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人类血管瘤集落形成细胞在含所述单细胞的培养物中扩增，

其中在所述方法步骤(a)-(d)的整个过程中使所述干细胞、胚状体和血管瘤集落形成细胞在无血清培养基中生长，

并且其中在步骤(b)中所述的至少两种生长因子包括BMP4和VEGF。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生长因子是包含同源异型盒蛋白、或其功能变体、或其活性片段的蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述所述同源异型盒蛋白包括HOXB4蛋白、或其功能变体、或其活性片段。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中在步骤(b)的整个过程中，向步骤(b)的所述培养物中多次加入所述生长因子。

7.根据权利要求4或5所述的方法，其中在步骤(b)和(d)的整个过程中，向步骤(b)和(d)的所述培养物中多次加入所述生长因子。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中每日加入所述蛋白一次。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其中每隔一日加入所述蛋白一次。

10.通过根据权利要求1所述的方法制备的分离的血管瘤集落形成细胞。

11.通过根据权利要求2所述的方法制备的分离的血管瘤集落形成细胞。

12.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述生长因子选自血管内皮生长因子(VEGF)、骨形态生成蛋白(BMP)、干细胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)促血小板生成素(TPO)和促红细胞生成素(EPO)。

13.根据权利要求6所述的方法，其中在培养细胞的0-48小时内将所述血管内皮生长因子(VEGF)或骨形态生成蛋白(BMP)，或两者加入到培养步骤(a)中。

14.根据权利要求6所述的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时内将所述干细胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)或促血小板生成素(TPO)、或它们的任何组合加入到所述培养物中。

15.根据权利要求4-5任一项所述的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时内将所述生长因子加入到步骤(b)。

16.根据权利要求5所述的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时内将所述生长因子加入到培养步骤(b)。

17.根据权利要求1所述的方法，还包括在步骤(b)中加入促红细胞生成素(EPO)。

18.根据权利要求2所述的方法，还包括在步骤(b)和(d)中加入促红细胞生成素(EPO)。

19.根据权利要求1-3任一项所述的方法，还包括从所述培养物中纯化所述人类血管瘤集落形成细胞的步骤。