[发明专利]分化无核细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种制备多种无核细胞的方法，其包含：在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；

其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞：

a.使用第一载体转染多种干细胞，所述第一载体包含编码MYC分子的核酸序列；

b.使用第二逆转录病毒载体转染所述干细胞，所述第二载体包含编码Bcl-2、Bcl-X或其组合的核酸序列；及

c.将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；

且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中引导朝向无核细胞分化的所述细胞因子是IL-3、EPO或其组合。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述MYC分子是c-Myc、l-Myc、n-Myc、s-Myc或其组合。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。

5.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含诱导所述Myc分子移位至细胞核。

6.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)(4-OHT)或二者接触。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或所述第一载体与所述第二载体二者是鼠科动物干细胞病毒(MSCV)或其衍生物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或所述第一载体与所述第二载体二者是MSCV-(IRES)-GFP或其衍生物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或所述第一载体与所述第二载体二者是MSCV-(IRES)-GFP，且进一步包含土拨鼠乙型肝炎病毒RNA调控元件(WRE)。

10.一种产生多种无核细胞的方法，其包含：在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；

其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞：

a.使多种干细胞与外源合成的第一肽接触，所述第一肽包含移位至细胞核的MYC分子；

b.使所述干细胞与外源合成的第二肽接触，所述第二肽包含Bcl-2、BCL-X或其组合；及

c.将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；

且其中在分化之前使所述第一肽与所述条件永生化干细胞不接触。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一肽进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一肽、所述第二肽、或所述第一肽与所述第二肽二者包含转运蛋白序列。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一蛋白质、所述第二蛋白质、或所述第一蛋白质与所述第二蛋白质二者包含TAT序列。

14.根据权利要求10所述的方法，其进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬(4-OHT)或二者接触。

15.一种凝血细胞，其根据权利要求1所述的方法来制备。

16.一种凝血细胞，其根据权利要求10所述的方法来制备。

17.一种红细胞，其根据权利要求1所述的方法来制备。

18.一种红细胞，其根据权利要求10所述的方法来制备。

19.一种治疗特征在于缺乏无核细胞的病症的方法，其包含：投予根据权利要求1制备的无核细胞。

20.一种治疗特征在于缺乏无核细胞的病症的方法，其包含：投予根据权利要求10制备的无核细胞。