[发明专利]靶向性凝固因子及其使用方法

说明书

本申请要求2008年5月16日提交的美国临时申请流水号61/053,932的权益，通过提及而将其内容完整收入本文。

发明领域

本申请涉及具有升高的功效的靶向性凝固因子。本发明进一步提供了治疗凝固因子缺乏病症患者的方法，其通过将凝固因子选择性靶向至其作用的生物学位置，诸如通过将凝血因子VIII(FVIII)靶向至红细胞和血小板来进行。还提供了药物组合物，其包含依照本发明的靶向性凝固因子。

发明背景

生物学药物的效率常常受到其在患者中的作用持续时间限制，尤其在疾病需要药物的持续调控时。因此，药动学特性的增强对于治疗剂在临床上的成功通常比药物效力的优化更重要。一种保护药物免于各种清除机制以延长半衰期的办法是添加靶向域，其促进药物结合至循环中的长寿命蛋白质诸如基质蛋白或细胞(诸如血细胞或内皮细胞)表面。例如，已经显示了治疗性肽或蛋白质定位于血细胞表面通过阻止正常的清除机制来延长其循环半衰期(Chen等，Blood 105(10)：3902-3909，2005)。可以使用极其多种分子作为靶向域。

在另一个例子中，在连接蜱(tick)抗凝蛋白的Kunitz型蛋白酶抑制剂(KPI)域与阴离子磷脂、磷脂酰-L-丝氨酸(PS)结合蛋白、膜联蛋白V(ANV)时，显示了融合蛋白(ANV-KPI)比非融合对应物更具活性，而且拥有更高的体内抗凝血活性(Chen等，2005)。由于ANV对PS和磷脂酰乙醇胺(PE)具有强亲和力，假设融合蛋白ANV-KPI能特异性靶向至血栓形成(thrombogenesis)位置处存在的富含PS/PE的阴离子膜结合的凝固酶复合物。类似地，Dong等报告了融合血纤蛋白选择性吸血蝠(Desmodus rotundus)唾液PA α1(dsPA α1)与尿激酶(uPA)/抗P-选择蛋白抗体(HuSZ51)以生成完全功能性的融合蛋白，在体外测定法中具有与非融合对应物相似的抗凝血活性。此外，显示了融合蛋白HuSZ51-dsPA α1结合凝血酶激活的人和犬血小板(Dong等，Thromb.Haemost.92：956-965，2004)。

已经在靶向抗凝血剂中进行了其它努力以阻止凝块和降低与血栓性疾病有关的死亡率(参见例如WO 94/09034)。Stoll等(Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.27：1206-1212，2007)表明了新近的开发，其中经由抗LIBS单链抗体(scFv_抗LIBS)将凝血因子Xa(FXa)抑制剂，即蜱抗凝血肽(TAP)靶向至GPIIb/IIIa(即一种在血小板表面上丰富表达的糖蛋白)上的配体诱导的结合位点。显示了融合蛋白scFv_抗LIBS-TAP即使在非靶向性对应物失效(fail)的低浓度也拥有有效的抗凝活性。

上述靶向性抗凝血剂是设计用于靶向特定细胞的融合蛋白。依照Stoll等，靶向性抗凝血剂应当是具有在与抗体融合时得到保留的高度有力的凝固抑制活性的小分子。不讨论抗凝血剂自其靶定位置中的融合蛋白的释放。

本发明聚焦于用于治疗血液学疾病诸如血友病的靶向性治疗性蛋白质。例如，用FVIII浓缩物或重组FVIII对血友病A患者的当前治疗受到这些因子的高成本和其相对较短的作用持续时间的限制。目前，通过在需要时静脉内施用FVIII或者作为一周数次施用的预防性疗法来治疗血友病A患者。对于预防性处理，一周三次施用FVIII。不幸地，此频率对于许多患者而言是成本昂贵的(cost prohibitive)。由于其在人中的短半衰期，必须频繁施用FVIII。尽管其在全长蛋白质上大于300kD的较大大小，FVIII具有仅约11-18(平均14)小时的人中半衰期(Gruppo等，Haemophila 9：251-260，2003)。对于那些能负担得起所推荐的频繁剂量给药的人，然而频繁地静脉内注射蛋白质是非常不方便的。对于患者而言会更方便的是，若可以开发出具有较长的半衰期，因此需要频率较少的施用的FVIII产品。此外，若半衰期得到延长，则可以降低治疗成本，这是因为那样可需要较少的剂量。因此，想要具有更有效形式的FVIII，其能降低有效剂量或者具有延长的作用持续时间以显著改善血友病患者的治疗选项。

还有，靶向性FVIII的持续血浆浓度可以通过降低FVIII的谷至峰水平，如此消除需要在早期时间点时引入超生理学水平的蛋白质，从而降低不利副作用的程度。因此，想要具有如下的FVIII形式，其具有持续不变的持续时间和比目前销售的形式更长的半衰期。