[发明专利]通过在含有羧基的不溶性材料上进行吸附来纯化天然钴胺素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过在含有羧基的不溶性材料上进行吸附来纯化和/或浓缩天然钴胺素的方法。

背景技术

维生素B₁₂(或钴胺素，Cbl)是一种复杂结构的有机金属辅因子。它只是通过细菌合成，而所有其他生物体经过复杂的食物链来获取该维生素。人体中B₁₂的缺乏引起严重的疾病，伴有神经系统异常、贫血以及最终死亡。

Cbl的核心结构(图1A)包括带有中心钴离子的咕啉环。它的下面配位位置(也称作α-位)被5′，6′-二甲基-苯并咪唑基(Bzm)占据。上面的轴向位置(β-位)可能含有以不同强度与钴结合的不同基团。然而，Cbl的所有变体在动物细胞内都被转化成辅因子甲基-和5′-脱氧-5′-腺苷基-钴胺素(分别为Me·Cbl，Ado·Cbl)。以上两种形式的钴胺素在生理条件下经过偶然的转化成为H₂O·Cbl，维生素B_12a。因此，Me·Cb、Ado·Cbl和H₂O·Cbl是天然钴胺素的三种普遍存在的变体。

工业纯化迄今已瞄准了该维生素的另一种形式，即CN·Cbl，其含有与Cbl的β位牢固结合的氰基。严格来讲，名称“维生素B12”是指CN·Cbl。这种形式是通过用KCN或NaCN处理细菌提取物并将生物钴胺素转化成CN·Cbl来制备。维生素B12在工业上是通过微生物发酵，利用几乎完全重组的脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans)和丙酸杆菌(Propionibacterium species)，然后将天然钴胺素通过化学方法(包括氰化接着用有机溶剂提取和纯化的步骤)转化成氰钴胺素形式来生产。化学转化步骤和随后的任何纯化步骤导致该生产工艺昂贵，对操作人员不安全而且不环保。

本文提出的方法不同于文件WO2006/024303中描述的方法，其使用了另一种具有不同结合性质的钴配位基团。在WO2006/024303中，H₂O·Cbl被描述为是使用含有四氮唑的基质作为Cbl-配位化合物从粗提取物中纯化。然而，已经发现含有四氮唑的物质不与Ado·Cbl和Me·Cbl结合，细胞提取物必须被强烈照射以使其他钴胺素转化为H₂O·Cbl。另外的缺点在于含四氮唑的物质价格相对较高。

本发明描述了一种纯化钴胺素的方法，该方法具有天然钴胺素与含有COOH基的物质之间相互作用的最佳条件。该物质可以是商业可得的材料，例如含有COOH基的Amberlite树脂。通过使用本发明来纯化钴胺素，意外地发现，很可能以比先前使用的方法更容易且低廉的工艺获得钴胺素，并且本质上减少或完全排除了污染且有毒的氰化物的应用。

发明内容

本文描述的发明涉及一种方法的应用以及该方法本身，其中该方法是用于获得包含至少一种钴胺素的浓缩溶液的方法，并且该方法包括步骤：

●提供包含至少一种类型的天然钴胺素的第一溶液，

●提供能够与所述天然钴胺素进行特异性相互作用的含有羧基的吸附材料，

●使所述含有至少一种类型的天然钴胺素的第一溶液与所述吸附材料接触，由此至少一部分所述至少一种类型的天然钴胺素被吸附和/或结合在所述吸附材料上，以及

●从所述吸附材料上洗脱所述至少一种类型的天然钴胺素，由此

●获得含有至少一种钴胺素的浓缩溶液。

可获得的天然钴胺素可以是5′-脱氧-5′-腺苷基-钴胺素(腺苷基-Cbl，Ado·Cbl)、甲基-钴胺素(甲基-Cbl，Me·Cbl)和水-钴胺素(水-Cbl，H₂O·Cbl)中的任何。

与其他方法相比，可以不使用氰化物或者使用减少量的氰化物来获得这些钴胺素。

通过上述方法获得浓缩溶液，该溶液包含至少一种天然钴胺素和/或CN·Cbl，其可以用于制备药物、膳食补充剂和/或维生素制剂。