[发明专利]生产己二酰基-7-ADCA的菌株

权利要求书

1.用于鉴定微生物菌株的一个或多个下述基因的方法，所述基因编码涉及将来自培养基的己二酸并入N-己二酰化的β-内酰胺化合物的一种或多种酶，所述方法可包括以下步骤：

a.选择涉及将酸活化成各自酰基-CoA化合物的一个或多个已知基因的核苷酸序列和/或任选地由所述基因编码的一个或多个已知酶的氨基酸序列；

b.使用从步骤(a)中选择的序列作为BLAST搜索中的探针，用于在能够生产N-己二酰化的β-内酰胺化合物的微生物菌株的可获得的核苷酸或氨基酸序列中鉴定同源序列。

2.根据权利要求1的方法，编码涉及将来自培养基的己二酸并入N-己二酰化的β-内酰胺化合物的一种或多种酶的所述基因选自下组，所述组由编码能够催化细胞内己二酸转化成己二酰基-CoA的酶如CoA-连接酶和CoA-转移酶的基因组成。

3.在包含己二酸的培养基中培养时能够生产N-己二酰化的β-内酰胺化合物的突变体微生物菌株，其特征是：所述菌株与非突变体亲本菌株相比，具有改进的将来自培养基的己二酸向N-己二酰化的β-内酰胺化合物的并入产率。

4.根据权利要求1的菌株，其特征是所述经改进的己二酸盐并入产率为至少5％。

5.前述权利要求中任一项的突变体菌株，其中所述突变体菌株的编码涉及将来自培养基的己二酸并入N-己二酰化的β-内酰胺化合物的一种或多种酶并且用根据权利要求1或2的方法鉴定的一个或多个基因，与其中所述基因未被过表达的亲本微生物菌株相比，在所述突变体菌株中被过表达。

6.根据权利要求3的菌株，其中涉及将来自培养基的己二酸并入N-己二酰化的β-内酰胺化合物的所述酶是己二酰基-CoA形成酶，优选地是酸性CoA连接酶(EC 6.2.1.xx)和/或酸性-CoA转移酶(EC 2.8.3.xx)。

7.根据权利要求4的菌株，其中所述编码酸性CoA连接酶(EC6.2.1.xx)的基因选自由以下组成的组：Pc13g14420(SEQ ID No：1)；Pc21g22010(SEQ ID No：2)；Pc22g20270(SEQ ID No：3)；Pc22g00960(SEQ ID No：4)；Pc12g05520(SEQ ID No：5)；Pc13g12270(SEQ ID No：6)；Pc18g05710(SEQ ID No：7)；Pc20g13500(SEQ ID No：8)；Pc13g01890(SEQ ID No：9)；Pc20g10840(SEQ ID No：10)；Pc13g05130(SEQ ID No：11)；Pc13g10810(SEQ ID No：12)；Pc22g06680(SEQ ID No：13)；Pc22g14900(SEQ ID No：14)；Pc22g16410(SEQ ID No：15)；Pc21g13540(SEQ ID No：16)；Pc21g20650(SEQ ID No：17)；Pc21g23730(SEQ ID No：18)；Pc21g21960(SEQ ID No：19)；Pc22g24780(SEQ ID No：20)；Pc06g01160(SEQ ID No：21)；Pc12g09980(SEQ ID No：22)；Pc15g00420(SEQ ID No：23)；Pc21g07810(SEQ ID No：24)和Pc21g09470(SEQ ID No 25)和与所述序列基本同源的序列。

8.根据权利要求4的菌株，其中所述编码酸性-CoA转移酶(EC2.8.3.xx)的基因选自由以下组成的组：Pc20g15639(SEQ ID No：26)；Pc13g02780(SEQ ID No：27)；Pc22g13680(SEQ ID No：28)；Pc22g03940(SEQ ID No：29)；Pc14g00590(SEQ ID No：30)；Pc16g00210(SEQ ID No：31)和与所述序列基本同源的序列。

9.根据前述权利要求中任一项的菌株，其中所述N-己二酰化的β-内酰胺化合物选自由己二酰基-6-APA，己二酰基-7-ADCA，己二酰基-7-ACA，己二酰基-7-ACCA，己二酰基-7-PACA，己二酰基-7-ADAC，己二酰基-7-ACCCA组成的组。

10.根据前述权利要求中任一项的菌株，其中所述菌株是真菌、细菌或酵母。