[发明专利]能够区分金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的培养基

说明书

本发明总体上涉及微生物分析领域。更具体地，本发明涉及用于生长、检测、鉴定和/或计数葡萄球菌的选择性培养基，该培养基允许区分金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)与凝固酶阴性葡萄球菌。

葡萄球菌(Staphylococcus)属的细菌或者葡萄球菌是许多医院感染的原因，并代表了重要的医院难题。这些细菌都是革兰氏阳性球菌(cocci)，其通过引发血浆凝固的蛋白凝固酶的产生的区别而分为两大类。因此存在凝固酶阴性葡萄球菌与凝固酶阳性葡萄球菌的区分，凝固酶阴性葡萄球菌的主要代表是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，凝固酶阳性葡萄球菌的主要代表是以致病力著称的金黄色葡萄球菌。葡萄球菌广泛存在于环境以及人和动物的皮肤和粘膜中。规律地从这些宿主脱落使得它们广泛分布于自然界中(水、土壤、空气、食品、物体)，医院环境要求严格的卫生措施和隔离病人来限制表皮菌株的散播。因此，金黄色葡萄球菌代表了80％至90％临床环境下分离的葡萄球菌，是引起许多医院环境感染的主要人病原体，这些感染例如著名的医院性肺炎、外科伤口感染、烧伤感染、异物感染(心脏瓣膜、髋假体、夹具等)以及全身性感染或败血病，它们通常归咎于使用血管内导管或者其他感染部位的细菌散播。

葡萄球菌，尤其是金黄色葡萄球菌在食品领域也形成相当的危害。事实上，金黄色葡萄球菌的某些菌株能产生肠毒素，消费者摄入之后会导致中毒，引起恶心、腹痛，尤为严重的是反复呕吐，常伴随腹泻。

因此，葡萄球菌食物中毒代表了一种细菌来源的食物中毒的主要形式。

通常通过动物和人，无论是病人或健康携带者，通过未消毒奶(乳腺炎)，通过空气和污染的表面或者接触了食物和健康或感染的携带者的设备来散播。

因此，食物中葡萄球菌尤其是金黄色葡萄球菌的检测和鉴定构成了主要的公共卫生挑战。

在用于检测、鉴定和计数葡萄球菌属细菌的培养基中，分为非选择性培养基，如哥伦比亚(Columbia)培养基或胰胨豆胨琼脂；以及选择性培养基如Chapman琼脂、Baird-Parker琼脂。金黄色葡萄球菌根据其形态特征及其溶血谱也可以在血琼脂中检测，但是这个方法不是非常灵敏和特异的，即使在在食品工业中有所使用，也使用很少。心脑肉汤也经常用于葡萄球菌的研究。

特异性细菌学培养基促进某些微生物的生长，并限制其他微生物的生长。它们含有至少一种除靶病原体以外的微生物的抑制剂。抑制剂的效果必须保持限制于所关注的微生物，因为所述所关注的微生物在它们产生的食品制品可以被破坏。用甘露醇作为底物的Chapman琼脂相当于普通营养物基质的高盐培养基，通过pH指示剂来检测其发酵。所述pH指示剂可以是有色指示剂或荧光指示剂。Baird-Parker培养基相当于高营养物基质，其添加了亚碲酸钾和氯化锂，这是常用于生长金黄色葡萄球菌的选择性试剂。氯化锂是肠球菌抑制剂。其他化学物质可以与亚碲酸钾和氯化钠或氯化锂组合：硫酸铵、山梨酸、甘氨酸、多粘菌素B。

然而，分析食品基质的潜在产毒性葡萄球菌呈现出特别的难题，这限制了为临床实践开发的方法的实际应用。事实上，通常推荐的培养基还允许未被视为食品污染剂的凝固酶阴性葡萄球菌的生长和根据所要求表型特征的检测。

对于Baird-Parker+RPF(兔血浆+牛纤维蛋白原)培养基，其是根据ISO6888-1和6888-2标准的参考培养基，普遍发现存在某些缺陷。

首先是难以辨认(lecture)和灵敏度：可能出现假阴性，这是由于这样的事实，即金黄色葡萄球菌的某些菌株不在该培养基上显现，或者呈现出非常弱且延缓的凝固酶，这提示存在凝固酶阴性葡萄球菌。而且，由于基质的干扰也可能观察到假阴性结果：事实上，为了计数金黄色葡萄球菌的低水平污染，进行样品的最小稀释(1/10)，这由于基质化合物的存在而导致难以辨认晕圈(例如奶和/或乳制品的样品：酪蛋白的白色掩盖揭示凝固酶的晕圈)。

Baird-Parker+RPF培养基需要组合凝血酶的来源和纤维蛋白溶酶原的来源。后者获得自动物的血液，这导致供给的可靠性问题(质量、数量等)。

而且，不可能在肉汤(液体培养基)中辨认晕圈，并且晕圈与培养基之间的对比可能会减弱。在融合菌落的情况下，难以区分产生晕圈与不产生晕圈的菌落。