[发明专利]病毒纯化

权利要求书

1.一种生产反转录病毒载体制剂的方法，所述方法包括过滤除菌步骤，其中所述过滤除菌步骤不是该生产方法中的最终步骤，其中所述反转录病毒载体衍自EIAV，且所述反转录病毒载体在过滤除菌之前的浓度小于或等于4.6x10¹¹个RNA基因组拷贝/ml反转录病毒载体制品，并且其中所述过滤除菌使所得的制剂不含污染物，使得所述制剂适用于临床应用。

2.权利要求1的方法，其中所述过滤除菌步骤在浓缩步骤之前进行。

3.权利要求1或2的方法，所述方法包括过滤除菌步骤，其中所述过滤除菌步骤不是该生产方法中的最终步骤，其中所述过滤除菌步骤在浓缩步骤之前进行，且其中所述浓缩步骤是该方法中的最后步骤，且所述过滤除菌步骤是该方法中的倒数第二个步骤。

4.权利要求2的方法，其中所述浓缩步骤用超滤来进行。

5.权利要求4的方法，其中所述超滤包括切向流过滤。

6.权利要求4或5的方法，其中所述超滤包括中空纤维超滤。

7.权利要求1或2的方法，其中所述过滤除菌步骤用最大孔径大小最多为0.22 μm的除菌过滤器进行。

8.权利要求1或2的方法，其中将包含反转录病毒载体的制品先稀释再进行过滤除菌步骤。

9.一种用于生产反转录病毒载体制剂的方法，该方法按时间顺序包括以下步骤(i)至(vi)：

(i)培养产生反转录病毒载体的细胞；

(ii)收获含有反转录病毒载体的上清液；

(iii)任选澄清上清液；

(iv)纯化反转录病毒载体以得到反转录病毒载体制品；

(v)对反转录病毒载体制品进行过滤除菌，其中所述过滤除菌使所得的制剂不含污染物，使得所述制剂适用于临床应用；和

(vi)浓缩反转录病毒载体制品以生产出最终的批量产品，

其中所述反转录病毒载体衍自EIAV，并且所述反转录病毒载体在过滤除菌之前的浓度小于或等于4.6x10¹¹个RNA基因组拷贝/ml反转录病毒载体制品。

10.权利要求9的方法，其中步骤(iv)用选自色谱法、超滤/渗滤或离心的方法或方法组合来进行。

11.权利要求10的方法，其中所述色谱方法选自离子交换色谱、疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、亲和色谱和反相色谱、固定化金属离子亲和色谱。

12.权利要求10的方法，其中所述离心方法选自区带离心、等密度离心和粒化离心。

13.权利要求10的方法，其中所述超滤/渗滤方法选自切向流渗滤、搅拌池渗滤和透析。

14.权利要求9-13中任一项的方法，其中包括至少一个降解核酸以改善纯化的步骤。

15.权利要求14的方法，其中所述步骤是核酸酶处理。

16.权利要求15的方法，其中所述核酸酶是Benzonase®核酸酶。

17.权利要求14的方法，其中在直到步骤(iv)为止并包括步骤(iv)的任何时间点进行核酸降解步骤。

18.权利要求14的方法，其中所述纯化步骤(iv)包括一个或多个缓冲液交换步骤。

19.权利要求9的方法，其中步骤(vi)用超滤来进行。