[发明专利]皮肌炎的诊断方法和诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及诊断皮肌炎的方法和试剂盒，以及用于诊断皮肌炎的抗原蛋白的用途。

背景技术

胶原病使其被视为自身免疫性疾病的基本特征是产生抗多种细胞组分的自身抗体。已知对应这些自身抗体的许多抗原是生命过程中必不可少的酶和调节因子。预期研究自身抗体及其对应抗原(自身抗原)的分子结构以及它们的生物学功能有助于阐明结缔组织病的病理。

多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)为炎性肌病，其中主要是骨骼肌炎症所引起的近端肌无力和肌肉疼痛。特别是当观察到典型皮肤症状如向阳性皮疹和Gottron氏丘疹时，患者被诊断为DM。多发性肌炎/皮肌炎是一种自身免疫性疾病，并且已知产生了多种自身抗体。已经报道了在PM/DM患者血清中存在抗体；这些抗体包括在肌炎患者中特别检测到的抗氨酰tRNA合成酶抗体(抗ARS抗体)、抗SRP抗体、抗Mi-2抗体和类似抗体以及抗U1RNP抗体、抗SS-A抗体和与肌炎相关的类似自身抗体。已知的是，对于相同肌炎特异性自身抗体为阳性的患者表现出相似的临床特征；这对于诊断、疾病类型分类、适当治疗方法的选择和预后评估在临床上是有用的。

相比之下，自身抗体阴性被认为是PM/DM亚型临床无肌病性DM(C-ADM)的特征之一。C-ADM特异性自身抗体的存在是未知的。已知C-ADM抵抗临床治疗，并且与不良预后的急进性间质性肺疾病(RP-ILD)有关。为了挽救患有RP-ILD的C-ADM患者的生命，已报道和推荐联合利用高剂量类固醇疗法和免疫抑制药物给药的早期有效治疗的功效。因为这个原因，具有相关RP-ILD的C-ADM的早期诊断在临床上是重要的，并且期望建立用于早期诊断的新指标。

根据以上背景，本发明人根据免疫沉淀(IPP)法研究了正常健康对照、患有包括C-ADM在内的结缔组织病的患者以及患有特发性肺纤维化的患者的血清。本发明人发现C-ADM患者的血清中存在能够识别一种140-kDa蛋白的新自身抗体，并且将该新自身抗体命名为“抗CADM-140抗体”(非专利文献1(NPL 1))。

抗CADM-140抗体在患除C-ADM以外的结缔组织病患者、特发性肺纤维化患者和正常健康对照中的任一组均未检测到。临床上观察到抗CADM-140抗体阳性患者中RP-ILD显著地频繁发生，这表明抗CADM-140抗体与RP-ILD之间存在关联(非专利文件2)。

该现象被认为对于预后特别不良的具有相关RP-ILD的C-ADM的早期诊断和治疗选择是有用的，并因此希望改善其预后。

MDA5具有SNP(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi？locusId＝64135)。其氨基酸序列和碱基序列的NCBI登录号为NM_022168。专利文献1(PTL 1)公开了MDA5和癌症之间的关系。

本发明人发表了非专利文献3(NPL 3)，其公开了本发明所涉及的技术。

引文目录

专利文献

PTL 1：日本未经审查的专利文件2003-531581号

非专利文献

NPL 1：Arthritis Rheum.46(9)：S398，2003

NPL 2：Arthritis Rheum.52(5)：1571-1576，2005

NPL 3：Arthritis Rheum.60(7)：2193-2200，2009

发明概述

技术问题

根据IPP方法，利用S³⁵标记的白血病来源的K562细胞提取物或HeLa细胞对抗CADM-140抗体进行了一般测量。虽然这是具有高灵敏度和高特异性的可靠测量方法，但是该方法使用同位素并需要复杂的程序。因此，该测量方法仅在数量有限的实验室中使用。

为了将抗CADM-140抗体的测量应用到实际临床诊断中，亟需建立能够容易地测量大量样品的测量系统。鉴定与抗CADM-140抗体相应的抗原、制备重组蛋白及建立通过ELISA的测量系统等对于建立该系统是重要的。

问题的解决方案

本发明人利用HeLa细胞cDNA文库克隆与抗CADM-140抗体相应的抗原基因，并且研究了该相应抗原蛋白的分子序列。结果，本发明人发现MDA5(黑色素瘤分化相关基因5)为与抗CADM-140抗体相应的抗原，并在这一发现的基础上完成本发明。

本发明提供了用于皮肌炎诊断的试剂盒和方法，如下逐项所述。