[发明专利]一种刺激细胞的标准样品有效
申请号: | 200980134557.1 | 申请日: | 2009-07-09 |
公开(公告)号: | CN102144165B | 公开(公告)日: | 2016-11-23 |
发明(设计)人: | 理查德·约翰·斯特宾 | 申请(专利权)人: | 英国健康保护局 |
主分类号: | G01N33/96 | 分类号: | G01N33/96 |
代理公司: | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 11279 | 代理人: | 彭晓玲;丛芳 |
地址: | 英国赫*** | 国省代码: | 英国;GB |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 刺激 细胞 标准 样品 | ||
1.一种制备细胞参考材料的方法,包括以下步骤:
(a)从人体或动物体分离获得细胞样品,上述的细胞样品所包括的细胞选取于以下类群的细胞:
外周血单核细胞;
细胞系;
凝血细胞;
(b)在存在细胞因子分泌抑制剂的情况下,刺激上述细胞产生细胞因子;
(c)添加固定剂固定上述受刺激细胞;
(d)冷冻干燥保藏上述固定的受刺激细胞。
2.一种制备细胞参考材料的方法,包括以下步骤:
(i)从人体或动物体分离获得混合细胞群,上述混合细胞群包括多个选自于以下类群的细胞类型:
外周血单核细胞;
凝血细胞;
(ii)分级分离上述混合细胞群,制备多个组分,在各个组分中含有细胞型的不同类群;
(iii)在存在细胞因子分泌抑制剂的情况下,对上述的一个或多个组分进行细胞刺激,产生细胞因子;
(iv)添加固定剂对各组分内的上述细胞进行固定;
(v)合并上述多个组分,制成差异刺激细胞混合物;
(vi)冷冻干燥保藏或超低温保藏上述差异刺激细胞混合物。
3.根据权利要求1或权利要求2所述方法,其中所述的细胞样品分离自哺乳动物体。
4.如权利要求3所述的方法,其中所述的细胞样品分离自人体。
5.根据前面任一权利要求所述的方法,其中所述的细胞是通过添加促细胞分裂剂而受到刺激的。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述的促细胞分裂剂含有PMA(12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)。
7.根据权利要求5所述的方法,其中所述的促细胞分裂剂含有离子霉素。
8.根据权利要求5所述的方法,其中所述的促细胞分裂剂含有PMA(12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)和离子霉素的混合物。
9.根据前面任一权利要求所述的方法,其中所述的细胞因子分泌抑制剂含有布雷菲德菌素A。
10.根据前面任一权利要求所述的方法,其中所述的固定剂含有低聚甲醛。
11.根据权利要求10所述的一种方法,其中所述的固定剂含有低聚甲醛和氯化铬的混合物。
12.根据前面任一权利要求所述的方法,在固定上述细胞之后、保存上述细胞之前,另外还包括去除残留固定剂的步骤。
13.根据前面任一权利要求所述的方法,在保存上述细胞之前另外还包括将上述固定细胞暴露于高渗环境的步骤。
14.根据前面任一权利要求所述的方法,在保存上述细胞之前另外还包括添加冷冻保护剂的步骤。
15.一种制备细胞参考材料的方法,包括以下步骤:
获取多个分离自多个个体的细胞样品;
各个细胞样品按照前面的从属于权利要求1的任一权利要求中方法进行处理;
在保藏上述细胞之前,另外还包括一个将固定的源于上述多数样品的细胞合并的步骤。
16.一种制备细胞参考材料的方法,包括以下步骤:
获得分离于多个个体的多个混合细胞群;
各个混合细胞群按照前面的从属于权利要求2的任一权利要求中的方法进行处理;
另外,在保存上述细胞之前还包括一个将固定的源于多个上述混合细胞群的细胞进行合并的步骤。
17.一种制备细胞参考材料的方法,包括以下步骤:
制备未刺激固定细胞,按照前文任意一个权利要求的方法步骤,但省略掉刺激步骤(b)或(iii);
上述未刺激固定细胞与按照前文任意一个权利要求的方法步骤制备的刺激固定细胞合并;
用冷冻干燥或超低温法保存上述混合细胞。
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