[发明专利]检测碱基的孔

权利要求书

1.一种用于检测样品中一个或多个核苷酸的突变体α-溶血素(α-HL)孔，所述突变体α-溶血素包括：

(a)每个均包含SEQ ID NO：2中所示序列或其变体的7个亚基；和

(b)对所述孔和所述核苷酸之间的相互作用有利的分子衔接体，

其中所述7个亚基中的一个或多个在SEQ ID NO：2的残基139处和/或附近被修改，以有利于所述衔接体的定位，并且

其中所述分子衔接体共价结合于一个或多个所述亚基，使得它位于SEQ ID NO：2的残基139处或附近。

2.权利要求1的突变体α-HL孔，其中所述7个亚基的一个或多个在SEQ ID NO：2的残基139处和/或附近包含谷氨酰胺。

3.权利要求2的突变体α-HL孔，其中所有所述7个亚基在SEQ IDNO：2的残基139处和/或附近包含谷氨酰胺。

4.权利要求2或3的突变体α-HL孔，其中所述7个亚基的一个或多个在SEQ ID NO：2的残基136、137、138、139、140、141和142的一个或多个处包含谷氨酰胺。

5.前述权利要求任一项的突变体α-HL孔，其中所述衔接体共价结合于一个或多个所述亚基中的SEQ ID NO：2的残基119、121或135。

6.权利要求5的突变体α-HL孔，其中一个或多个所述亚基中的残基119、121或135被修改，以有利于所述衔接体的共价结合。

7.权利要求6的突变体α-HL孔，其中通过引入半胱氨酸对残基119、121或135进行修改。

8.前述权利要求任一项的突变体α-HL孔，其中还将所述7个亚基的一个或多个进行进一步修改，以有利于所述衔接体的共价结合。

9.权利要求8的突变体α-HL孔，其中通过在SEQ ID NO：2的残基113处引入精氨酸对所述一个或多个亚基进行修改。

10.前述权利要求任一项的突变体α-HL孔，其中所述孔包含：

(a)6个SEQ ID NO：8所示的α-HL M113R/N139Q的亚基和1个SEQ ID NO：14所示的α-HL M113R/N139Q/L135C-D8的亚基；

(b)6个SEQ ID NO：8所示的α-HL M113R/N139Q的亚基和1个SEQ ID NO：10所示的α-HL M113R/N139Q/G119C-D8的亚基；或者

(c)6个SEQ ID NO：8所示的α-HL M113R/N139Q的亚基和1个SEQ ID NO：12所示的α-HL M113R/N139Q/N121C-D8的亚基。

11.前述权利要求任一项的突变体α-HL孔，其中所述分子衔接体是环糊精。

12.权利要求11的突变体α-HL孔，其中所述环糊精是七-6-氨基-β-环糊精(am₇β-CD)。

13.前述权利要求任一项的突变体α-HL孔，其中所述衔接体经双功能的交联剂共价结合于所述孔。

14.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码具有SEQ ID NO：2所示序列或其变体的α-HL的亚基，其中所述亚基在SEQ ID NO：2的残基119、121或135处具有半胱氨酸。

15.权利要求14的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸包含SEQ IDNO：9、11或13所示的序列。

16.一种用于产生突变体α-HL孔的试剂盒，包含均编码具有SEQ IDNO：2所示序列或其变体的α-HL的亚基的7个多核苷酸，其中所述亚基中的至少一个在SEQ ID NO：2的残基119、121或135处具有半胱氨酸。

17.权利要求16的试剂盒，其中所述试剂盒包含：

(a)6个包含SEQ ID NO：7所示序列的多核苷酸；以及

(b)1个包含SEQ ID NO：9、11或13所示序列的多核苷酸。