[发明专利]血小板检验方法和血小板检验装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用少量血液来测定血液的血小板机能的方法和检验装置，更具体而言，涉及一种使用微芯片来检验血液的血小板机能的方法和检验装置。

背景技术

(血小板凝集检验的现有技术中的问题)

血小板的活化和凝集在动脉的血栓形成(白色血栓)和一次止血中起到关键作用。

当血管受损时，血小板直接和间接地与血管内皮细胞下存在的胶原蛋白结合。在血液缓慢流动的环境下(在低剪切应力下)，它们的结合主要是经由诸如GPVI等胶原蛋白受体的直接结合，而在血液快速流动的环境下(在高剪切应力下)，vWF与胶原蛋白结合，并且血小板的GPIbα受体与vWF结合，从而导致血小板与胶原蛋白的间接结合。与胶原蛋白的直接和间接相互作用使血小板活化，并且通过这种刺激，从致密颗粒和α-颗粒释放诸如ADP和血清素等各种血小板活化物质。

这样释放出的血小板活化因子活化各自的血小板和附近的血小板。在活化的血小板中，纤维蛋白原受体GPIIb和IIIa在结构上变为活化型，从而使血小板对于纤维蛋白原变为高亲和型。通过二聚的纤维蛋白原，活化的血小板彼此顺次交联，从而造成血小板凝集。

然而，大多数常规的血小板凝集计利用因大量血小板活化试剂的刺激引起的血小板活化和凝集过程的方法(非专利文献1)。

因此，在与生理血小板活化条件极为不同的环境下诱发血小板活化反应，并且尽管可以测定在诸如各受体的先天机能异常等机能方面的明显差异，但是难于测定更多的生理血小板机能。

PFA-100(血小板机能分析仪：非专利文献2)是一种测定由于接触固定胶原蛋白、剪切应力和接触血小板诱发物质的血小板总活化引起的孔堵塞的系统。与使用单独的血小板活化诱发物质的刺激引起的常规血小板凝集相比，这是一种使用更近似于生理环境的测定系统。然而，不可以控制数据变化以及通过孔的血液中所含的诱发物质的浓度变化。因此，不能适宜地测定在血小板活化诱发物质处于极低浓度或不存在的条件下(在已经因血栓症发展而活化血小板的患者中观察到)诱发的血小板凝集；以及在血小板机能异常的患者中测定血小板机能的情况下利用极高浓度的血小板诱发物质的刺激引起的血小板凝集能力。

此外，专利文献1公开了一种测量血小板机能的方法，其中血液被允许通过毛细管内部，然后通过分隔件的开口部，并测量因血栓形成而堵塞分隔件的开口部所需的时间。然而，由于在这种方法中加入大量的血小板活化试剂，所以例如在血小板被活化但血小板数量减少的情况下以及在血小板数量正常但血小板机能减弱的情况下，难以测定反映体内状况的详细血小板机能。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：JP 2007-298511A

非专利文献

非专利文献1：“Platelet Aggregability Test”，Thrombosis and Circulation，vol.12，No.4，p17-20，2004

非专利文献2：“Measurement of Platelet Aggregability with PFA-100”Thrombosis and Circulation，vol.13，No.3，p90-94，2005

发明内容

在诸如败血症和播散性血管内凝血综合征(DIC)等疾病中，由于血管内皮紊乱和血栓形成，血小板处于活化状态，并且还形成血小板和白血球之间的复合体等。此外，由于持续的血栓形成非常消耗血小板，所以尽管体内血栓形成但仍可能出现出血症状。

在常规的血小板机能检验中，难以进行严格反映这种症状的检查。

例如，在浊度法中，即使在血小板减少的情况下，当针对血小板诱发物质的反应性提高时，血小板机能也被判定为提高(增强)。此外，由于因体内的炎症反应等形成并大大影响血栓形成的血小板和白血球之间的复合体在用于制备富血小板血浆的离心分离过程中与红血球一起沉积，所以它们未包含在富血小板血浆中。

此外，当使用PFA-100时，在强血小板机能的患者和弱血小板机能的患者中测定时使用相同浓度的诱发物质，使得不能适宜地进行确认在诱发物质不存在或处于极低浓度条件下的自然凝集诱发或者确认在给予抗血小板剂的患者中在诱发物质的浓度极高条件下药剂的药效的检验。此外，即使在使用PFA-100测定时堵塞时间延长的情况下，也难以进行血小板机能减弱的情况与血小板数量减少但血小板机能提高(在活体内活化)的情况之间的比较。

有鉴于上述情形，本发明的目的是提供一种使用少量血液在与血流同等环境下能够有效和正确地评价血小板机能的装置和方法。