[发明专利]使用AROMATOLEUM AROMATICUM EBN1（固氮弧菌属物种EBN1）的醇脱氢酶生产L-去氧肾上腺素的方法

权利要求书

1.一种生产式IV的取代的光活性醇或者其盐的方法，在各种情形下，该光活性醇或其盐在立体异构体方面为纯的形式，或者为立体异构体的混合物，

其中

Cyc代表单环或多环，饱和或不饱和的，碳环或杂环的，任选单或多取代环，其具有至少一个游离羟基，和

R₁和R₂彼此独立地代表H或者任选单或多取代的烷基；

其中

a)Cyc具有上面规定含义的式I

的酮在脂肪醇存在下，与卤化剂反应得到式II的卤代的化合物

其中Cyc具有上面规定的含义并且Hal代表卤素原子；

b)生成的式II的化合物被酶促还原为式III的醇

其中Cyc和Hal具有上面规定的含义；和

c)生成的式III的醇与式HNR₁R₂的胺反应得到式IV的化合物，其中R₁和R₂具有上面规定的含义。

2.如权利要求1所述的方法，其中阶段a)的反应在每摩尔式I的链烷酮中存在1至10摩尔当量的醇的条件下发生。

3.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段c)中的化学反应在开链或环状的醚溶液中发生。

4.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)是通过选自醇脱氢酶(ADH)(E.C.1.1.1.1)的酶来催化。

5.如权利要求4所述的方法，其中醇脱氢酶是选自来自固氮弧菌属的微生物的酶，特别是来自细菌Aromatoleum aromaticum EbN1的酶。

6.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)的酶是选自具有多肽序列的酶，该多肽序列选自

(i)SEQ ID NO：2，或

(ii)相对于SEQ ID NO：2，至多25％的氨基酸残基通过添加、缺失、插入、置换、倒位或其组合而改变和/或仍旧具有SEQ ID NO：2的酶促活性的至少50％的序列。

7.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)的反应是通过添加还原当量，特别是NADH或NADPH而进行的，并且任选地所消耗的还原当量在反应期间再生。

8.如权利要求7所述的方法，其中再生是酶促地、电化学地、或电酶促地进行。

9.如权利要求8所述的方法，其中再生是酶促地发生的并且再生酶选自ADH以及与ADH不同的脱氢酶，特别是葡萄糖脱氢酶、甲酸盐脱氢酶、亚磷酸盐脱氢酶。

10.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)的反应在天然或重组地表达ADH的微生物存在下，或者在源自该微生物、含有ADH的部分存在下，或者在源自该微生物、含有ADH的提取物存在下发生。

11.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)的反应在生产ADH的微生物存在下，或者在源自该微生物的含ADH的部分或提取物存在下发生，该微生物选自肠杆菌科、假单胞菌科、根瘤菌科、乳杆菌科、链霉菌科、Rhodococcaceae、红环菌科和诺卡氏菌科细菌。

12.如权利要求11所述的方法，其中微生物是重组微生物，其转化有编码根据权利要求4-6之一定义的醇脱氢酶的核酸构建体。

13.如前述权利要求之一所述的方法，其中阶段b)在两相液态反应介质中进行。

14.如权利要求13所述的方法，其中使用水相-有机反应介质，并且式II的离析物和式III的产物在有机相中比在水相中更加可溶。

15.一种生产通式II的化合物的方法，

其中Cyc和Hal具有上面规定的含义，

其中Cyc具有上面规定含义的式I

的酮在脂肪醇存在下，与卤化剂反应得到式II的卤代的化合物。

16.如权利要求15所述的方法，其中阶段a)中的反应在每摩尔式I的酮中存在1至10摩尔当量的醇的条件下发生。