[发明专利]乳腺癌转移的判断方法及血清的评价方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于判断接受过乳腺癌摘除手术的患者有无乳腺癌转移的乳腺癌转移判断方法，以及有助于获得判断乳腺癌转移的指标的血清的评价方法。

本申请要求于2008年9月19日申请的日本国专利申请第2008-241302号的优先权，在此引用其全部内容。

背景技术：

在接受了乳腺癌摘除手术的患者中，确认有无乳腺癌转移对于决定术后治疗方针上非常重要。特别是当发现有癌转移到远离原发灶的脏器和淋巴结的远处转移时，在对患者施以适当治疗的基础上，确认有无乳腺癌转移极为重要。

诊断因术后乳腺癌转移而导致的癌症复发的方法已知有超音波(echo)、MRI(核磁共振)、乳房X光摄影检查等图像检查。然而，这些图像检查有一些缺陷，比如需要熟练的技术，做图像检查时所使用的装置会给患者带来不快，且成本高等。

在人等高等真核生物的染色体DNA中，CG二核苷酸序列构成的CpG部位的胞嘧啶有时会被甲基化。此CpG部位的胞嘧啶甲基化发挥着抑制基因表达的功能。比如，基因的启动子区存在含有大量CpG部位的区域，此基因的启动子区胞嘧啶有无甲基化控制着该基因的DNA的转录的开关。

DNA甲基化对基因表达的控制在早期胚胎发育、组织特异性的基因表达、基因印记、X染色体失活、染色体稳定化、DNA复制类型等各种现象中发挥着重要的作用。已有报告称，很有可能DNA的甲基化与癌症等疾病有很大关系。

分析上述DNA甲基化的方法已知有甲基化特异性PCR法。此方法用亚硫酸氢盐等将非甲基化胞嘧啶转化为其他碱基基的试剂(非甲基化胞嘧啶转化剂)，将待分析DNA的非甲基化的胞嘧啶(非甲基化胞嘧啶)转化为其他碱基(非甲基化胞嘧啶转化处理)。然后用引物组对扩增胞嘧啶未转成其他碱基的序列，进行PCR反应，通过检查有无扩增产物即可检测出DNA有无甲基化。

在此，已知GSTP1、RASSF1A和RARb都是CpG岛在乳腺癌原发灶高度甲基化的基因。非专利文献1上记述了一种乳腺癌鉴别方法，即通过调查采自患者的血清中所含APC、GSTP1、RASSF1A以及RARb的CpG岛有无甲基化来鉴别乳腺癌。然而，非专利文献1关于判断术后患者中有无乳腺癌转移的方法毫无记述。

先行技术文献

非专利文献

非专利文献1：穆罕默德·O·霍克(Mohammad O.Hoque)等人，《乳腺癌检测用血浆DNA中的四基因异常甲基化检测(Detection of Aberrant Methylation of Four Genes in Plasma DNA for the Detection of Breast Cancer)》，临床肿瘤学杂志(Journal of Clinical Oncology)，第24卷，第26号，2006年9月10日，p.4262-4269。

发明内容：

本发明的目的是提供一种可以在不给患者带来痛苦的情况下、低成本、便捷地判断接受了乳腺癌摘除术后的患者有无乳腺癌转移的乳腺癌转移判断方法。本发明的另一个目的是一种血清评价方法，该方法可以在不给患者带来不快的情况下、低成本、便捷地获取帮助判断接受了乳腺癌摘除术后的患者有无乳腺癌转移的指标。

即，本发明涉及：

(1)一种乳腺癌转移判断方法，包括以下步骤：

获取步骤，获取乳腺癌摘除术后患者的血清；

检测步骤，检测在获取步骤中获得的血清中所含GSTP1、RASSF1A和RARb各自的CpG岛中的甲基化；

判断步骤，当检测步骤从选自由GSTP1、RASSF1A和RARb构成的组中至少之一的CpG岛检测出甲基化时，判断为乳腺癌转移；

(2)根据上述(1)所述方法，其特征在于，转移是远处转移；

(3)根据上述(1)所述方法，其特征在于，在检测步骤用甲基化特异性PCR法检测GSTP1、RASSF1A和RARb各自的CpG岛的甲基化；

(4)根据上述(1)所述方法，其特征在于，甲基化特异性PCR法用以下三个引物组实施：

含有序列号1和序列号2所示引物的第一引物组，

含有序列号3和序列号4所示引物的第二引物组，

含有序列号5和序列号6所示引物的第三引物组；

(5)一种乳腺癌转移的判断方法，包括：

获取步骤，获取乳腺癌摘除术后患者的血清；

检测步骤，检测在获取步骤中获得的血清中所含GSTP1、RASSF1A和RARb各自的CpG岛的甲基化；

定量步骤，测定在获取步骤中获得的血清中所含乳腺癌肿瘤标志物的量；