[发明专利]用于改良的治疗特征的抗体的结构变体

权利要求书

1.改良嵌合的、人源化的或人抗-CD20抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：在嵌合的、人源化的或人抗-CD20抗体或其抗原结合片段的重链的第三个互补性决定区(CDR)序列中，产生至少一个氨基酸置换，以制备置换的抗体或其抗原结合片段，其中所述置换的抗体或其抗原结合片段具有至少一种选自下述的改良特性：更慢的离开速率、更慢的抗原解离速率、更高的CDC活性、更高的ADCC活性、更高的细胞凋亡活性、在没有交联存在下更大的在体外诱导细胞死亡的能力、和当给受试者施用CD20-阳性的细胞时更大的在体内杀死或抑制CD20-阳性细胞的生长的能力。

2.权利要求1的方法，其中所述CD20-阳性的细胞是B-细胞。

3.权利要求1的方法，其中所述置换是在抗体的重链CDR3 (CDRH3)的Kabat位置101。

4.权利要求3的方法，其中所述置换包括：用天冬氨酸残基替换在Kabat位置101处的天冬酰胺残基。

5.权利要求4的方法，其中所述置换的抗体包含在Kabat位置94处的精氨酸残基，且在Kabat位置101处的天冬氨酸残基与在Kabat位置94处的精氨酸残基形成离子键。

6.权利要求1的方法，其中所述置换的抗体或其片段抑制利妥昔单抗的结合CD20。

7.权利要求1的方法，其中所述置换的抗体是veltuzumab。

8.权利要求4的方法，其中天冬氨酸置换在Kabat位置101处的天冬酰胺导致抗-CD20抗体离开CD20的解离速率减慢至至多1/2。

9.权利要求1的方法，其中未置换的抗体的CDR序列与鼠抗-CD20抗体的CDR序列相同。

10.权利要求9的方法，其中所述鼠抗-CD20抗体包含轻链CDR序列                                                、和重链CDR序列。

11.权利要求4的方法，其中所述置换的抗-CD20抗体或其片段包含轻链CDR序列、和重链CDR序列 。

12.权利要求1的方法，其中所述人源化的抗-CD20抗体包含人源化的抗-CD22抗体依帕珠单抗的框架区序列、或人源化的抗-CD20抗体veltuzumab的框架区序列。

13.权利要求4的方法，其中天冬氨酸置换在Kabat位置101处的天冬酰胺残基导致暴露于所述抗体的Daudi细胞的补体-依赖性的细胞毒性增加。

14.权利要求4的方法，其中天冬氨酸置换在Kabat位置101处的天冬酰胺残基导致暴露于所述抗体的Daudi细胞的补体-依赖性的细胞毒性的EC₅₀降低了30-40%。

15.治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括：

a) 得到通过权利要求2的方法制备的置换的嵌合的、人源化的或人抗-CD20抗体或其抗原结合片段；

b) 将所述置换的抗-CD20抗体或其片段施用给受试者；和

c) 治疗受试者的疾病，其中所述疾病选自：B-细胞介导的免疫病、自身免疫病、B-细胞淋巴瘤和白血病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、免疫性溶血性贫血、同种致敏和冷球蛋白血症。

16.权利要求15的方法，其中所述疾病是免疫性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮、干燥综合征、伊文思综合征、关节炎、动脉炎、寻常天疱疮、肾移植排斥、心脏移植排斥、类风湿性关节炎、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、弥散性B-细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病和多发性骨髓瘤。

17.权利要求15的方法，其中所述置换的抗体或其片段是裸抗体或其片段。

18.权利要求15的方法，另外包括：在施用所述置换的抗体或其片段之前、同时或之后，给所述受试者施用至少一种治疗剂。

19.权利要求15的方法，其中所述抗体或其片段缀合在至少一种治疗剂上。