[发明专利]利用抗体库阵列(ARA)发现靶标特异性抗体的方法和组合物

权利要求书

1.用于制备抗体库阵列(ARA)的方法，该方法包括：

(a)从每个有效数量的人类供体中获得至少10⁴记忆B细胞；

(b)制备人类B细胞群，所述的其中所述的细胞群含有至少10⁵不同种类的自然生成抗体，其中每个抗体有自然配对的重链和轻链；

(c)将所述的B细胞群分成B细胞亚群，每个细胞亚群产生至少1种不同种类的抗体；

(d)扩增每个B细胞亚群以产生扩增的B细胞培养；

(e)在所述的B细胞能够分泌抗体到培养基的条件下，在所述的培养基中培养所述的每个B细胞培养；和

(f)将所述的分泌到培养基中的抗体置于固体表面，从而产生含有抗体库的抗体库阵列(ARA)。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：

(g)用靶标物探测抗体库阵列来确定对所述的靶标有特异性的抗体或者抗体可变区或者其部分。

3.根据权利要求1所述的方法，其中B细胞被永生化以产生永生化的B细胞培养。

4.根据权利要求1所述的方法，进一步包括以下步骤：

(h)决定哪个B细胞培养能够产生所述的靶标抗体；和

(i)从所述的B细胞培养中分离能够产生所述的靶标抗体的B细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中抗体被放置于阵列表面，所述的表面包括依次捕获抗体的Fc区的蛋白质A或者蛋白质G。

6.根据权利要求1所述的方法，其中b步骤中的B细胞被置于微梯度板的孔内。

7.根据权利要求1所述的方法，其中b步骤中的B细胞群含有至少10⁷种不同种类的自然生成的抗体。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述的有效的人类供体数至少为10。

9.根据权利要求1所述的方法，其中抗体库包含至少10⁵自然生成的有自然配对的V_H区和V_L区的人类抗体，其中所述的抗体为从足够多样的病人群体采集得到的永生化人类B细胞分泌得到的，以至于所述的库内的抗体有与人类整体免疫实质上相似的结合活性的多样性。

10.根据权利要求9所述的方法，其中自然生成的人类抗体是由可以识别至少10²不同靶标的人类B细胞表达的。

11.根据权利要求9所述的方法，其中的B细胞进一步是永生化的。

12.根据权利要求11所述的方法，其中永生化的B细胞能够表达埃-巴二氏病毒抗原。

13.根据权利要求11所述的方法，其中永生化的B细胞分泌抗病原体的抗体，所述的病原体从下述组成的组中选择：RNA病毒，DNA病毒，细菌，酵母，寄生虫和真菌。

14.根据权利要求11所述的方法，其中永生化B细胞分泌针对由恶性或者良性肿瘤细胞所表达抗原的抗体

15.根据权利要求11所述的方法，其中永生化的B细胞分泌抗体，其中抗原从下述物质组成的组中选择：与神经退行性疾病结合的多肽；细胞因子，趋化因子，生长因子，黏附分子和共刺激分子及其受体。

16.制备自然配对的免疫球蛋白的方法，该方法包括下述步骤：

(a)从非永生化B细胞群中分离RNA样本，其中每个B细胞群平均可以表达1-100不同种类的抗体；

(b)利用众多RNA样本实施逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)；和

(c)分离可以自然配对的V_H区和V_L区对应的DNA；

(d)在合适的可以可以表达所述的V_H区和V_L区的宿主内克隆所述的V_H区和V_L区对应的DNA；和

(e)在免疫球蛋白重链和轻链环境下表达所述的V_H区和V_L区，从而形成自然配对的免疫球蛋白。