[发明专利]用于确定分析物比的校准表面方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请是2008年8月21日提交的美国非临时申请No.12/196,132(律师卷号：02558B-082500US)的继续申请且要求其优先权，其全部内容通过引用通用地结合于此。

发明背景

1.技术领域

本发明一般地涉及用于测量样本中的分析物比的方法。该方法一般地应用于其结果表示为比的任何一对分析物。另外，多个比可表示为多对分析物比。

背景技术

计算样本中的两个或以上分析物之比在各种背景中是有用的比较。比经常用于补偿样本中分析物的组分或浓度的可变性。举例而言，当测量存在于尿液中的分析物时，任何给定样本中的分析物浓度可显著变化。这些浓度变化可通过创建存在于样本中的不同分析物之间的比来归一化。举例而言，可在尿液分析物浓度和尿液中的肌氨酸酐浓度之间创建比。在样本中的两个分析物之间创建该比允许根据浓度波动的更有意义的测量。还有可能将组织中的期望分析物浓度针对总蛋白或者例如清蛋白的特定蛋白浓度而归一化。比还可补偿测量中的相关错误，例如稀释误差。

在图1中示出用于计算分析物浓度比的最常规现有方法的简述。

在步骤101，从患者取试样。示例试样包括血液、尿液、或者其它体液。该试样形成样本的基础，将根据其测量并计算分析物比。试样不一定直接来自患者。可从其它源获得试样。

在步骤102，试样转换为经预处理的样本。经预处理的样本还可称作化验样本。该步骤可由在执行任何分析物测量之前对试样进行的任何动作组成。举例而言，在某些实施例中，可对试样进行取样并以特定量稀释。在其它实施例中，可向试样添加抗凝剂。该步骤是可选的，因为可能有时整个未改变的试样将用作经预处理的样本。

在步骤103和104测量该样本。在这两个步骤中，样本中的感兴趣的量表示为响应量。步骤103包含所有由仪器所作的以使预处理的样本准备好被读取的处理。处理样本可包含各种步骤。将多分析物夹层免疫测定作为示例，该样本与连接到固相的抗体或特定接合试剂反应，清洗固相以移除与一个或多个标记的抗体或接合试剂起反应的未接合材料，并清洗以移除未接合标记试剂以用于响应量的后继读取。其它示例包括高性能液相层析法(HPLC)、免疫测定法、电泳法、毛细管电泳法、紫外/可视/红外光谱法、拉曼光谱法、表面增强拉曼光谱法、质谱法、气相层析法、或其他。可存在无需对样本采取处理步骤的实例。

在步骤104中，所选读取技术用于确定样本中各分析物响应量，其将用于比。步骤104称作读取分析物(响应量)。可能适当的读取技术包括：荧光、吸光率、反射率、离子流、电化学电位、光密度、色彩、表面等离振子共振、或其它。通常基于要测量的样本和分析物特性来选择处理和读取技术。使用所选测量方法测量的分析物响应量可以是适合于所选方法的任何单位。这些单位可以是荧光单位、光密度、色彩、离子流、化合光单位、电信号或其它。分析物还可按照多路复用方式测量，其中许多分析物在单个通道中测量，或者它们在多个但分开的个别化验中测量。

分析物响应量之后转换为其相应浓度。该步骤在步骤105和106中示出。典型地该转换使用诸如校准曲线的装置来实现。

在计算分析物浓度比之前，各分析物响应量必需分别转换为浓度值。分析物浓度值不仅取决于测量的给定分析物响应量，还取决于样本中的其它分析物响应量，这是因为分析物之间存在诸如交叉反应的交叉作用。使用所选测量技术来测量的样本中分析物响应量和同一样本中分析物浓度之间的关系通常是非线性的。因为该非线性关系，分析物响应量比与分析物浓度比可大有不同。因此，如果要计算分析物浓度比，必需在计算该比之前分别计算各分析物浓度。

校准曲线通常用于将分析物响应量转换为浓度值。可通过选择曲线模型然后确定模型系数值来创建分析物校准曲线，其中确定模型系数值是通过从其中分析物浓度在进行任何测量之前就是已知的一组样本中测量分析物响应量来实现的。从这些已知样本获得的分析物响应量可作图以产生校准曲线，然后该校准曲线用于推断未知浓度的样本中的分析物浓度如何。针对要转换为浓度值的各分析物响应量创建分别的校准曲线。实际上，具有确定系数值的模型方程可直接用于确定浓度而不用作图。参照校准曲线通常被采用，因为这比参照校准方程更直观。

在步骤107，使用校准曲线计算的各浓度用于确定期望的分析物比。这可通过诸如除法的简单数学运算来实现。分析物比通常是没有单位的。