[发明专利]Δ6去饱和酶及其在制备多不饱和脂肪酸中的用途

权利要求书

1.分离的核酸分子，其包含编码Δ6去饱和酶的核苷酸序列，所述分离的核酸分子选自：

(a)编码如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的分离的核酸分子；

(b)在以下杂交条件下与(a)杂交的分离的核酸分子：0.1X SSC，0.1％ SDS，65℃，并且用2X SSC，0.1％SDS洗涤，随后用0.1X SSC，0.1％ SDS洗涤；或者，

与(a)或(b)完全互补的分离的核酸分子。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中至少227个密码子经密码子优化以在耶氏酵母属中表达。

3.权利要求1的分离的核酸分子，所述分离的核酸分子选自SEQID NO：1和SEQ ID NO：46。

4.分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码至少471个氨基酸的Δ6去饱和酶的第一核苷酸序列，所述酶基于BLASTP比对方法在与具有如SEQ ID NO：2所示的序列的多肽进行比较时具有至少80％的同一性；

或包含第一核苷酸序列的互补序列的第二核苷酸序列。

5.编码如SEQ ID NO：2所示的Δ6去饱和酶的多肽。

6.嵌合基因，其包含可操作地连接至少一种调控序列的权利要求1或4中任一项的分离的核酸分子。

7.包含权利要求1或权利要求4的分离的核酸序列的微生物宿主细胞。

8.权利要求7的微生物宿主细胞，其中所述微生物宿主细胞选自酵母、藻类、细菌、类眼虫、原生藻菌、卵菌和真菌。

9.权利要求8的微生物宿主细胞，其中所述细胞是选自被孢霉属(Mortierella)、破囊壶菌属(Thraustochytrium)、和裂殖壶菌属(Schizochytrium)的属的成员。

10.权利要求8的微生物宿主细胞，其中所述细胞是含油的酵母。

11.权利要求10的微生物宿主细胞，其中所述含油酵母是选自下组的属的成员：耶氏酵母属(Yarrowia)、假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、隐球酵母属(Cryptococcus)、丝孢酵母属(Trichosporon)和油脂酵母属(Lipomyces)。

12.一种生产γ-亚麻酸的方法，所述方法包括：

a)提供表达权利要求1或权利要求4的核酸序列的微生物宿主细胞；以及

b)在产生γ-亚麻酸的条件下，在亚油酸源的存在下培养(a)的宿主细胞。

13.一种生产十八碳四烯酸的方法，所述方法包括：

a)提供表达权利要求1或权利要求4的核酸序列的微生物宿主细胞；以及

b)在产生十八碳四烯酸的条件下，在α-亚麻酸源的存在下培养(a)的宿主细胞。

14.根据权利要求12或13中的任一项的方法，其中：

a)所述分离的核酸分子具有选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：46的核酸序列；并且

b)所述宿主细胞是解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)。