[发明专利]由多糖和HBP构成的复合物

说明书

本发明涉及治疗性蛋白质的制剂，和更特别地涉及与肝素相结合的蛋白质(称为肝素结合蛋白(HBP))的制剂，所述肝素结合蛋白在体内以复合物的形式与肝素相联合，这允许其稳定化和其体内活性的维持。

肝素是携带羧酸根和硫酸根官能团的天然多糖，其总电荷为阴离子的。但是，该多糖因其抗凝活性而知名，因为它参与凝血酶和抗凝血酶III之间的复合物的形成，并且该抗凝活性与治疗用途，例如在瘢痕形成、生长调节、骨重构的治疗中的治疗用途不相容。

这些HBP中的一些已成为药物开发的目标。然而，已知这些蛋白质是在物理上(聚集)和在化学上(酶促或化学降解)不稳定的。该不稳定性可以在制剂中和/或在施用部位处表现出来。它可以引起免疫反应或效力丧失。为了补偿活性的丧失，采用诸如增加施用的剂量或频率的解决办法。这些解决办法不是令人满意的，尤其是由于这些蛋白质的高价格。

例如，Genentech公司开发了VEGF制剂，其用于糖尿病性足溃疡的瘢痕形成。进行了第一个临床研究，其中每两天进行治疗施用。第二个研究以每天施用来进行，这毫无疑问地是为了答复对于每两天进行应用而言太短的VEGF作用持续时间的问题。

此外，已证实，可能在生长因子和聚合物之间形成复合物，以便使其稳定、增加其溶解度和/或增加其活性。

因此，在申请者的专利FR0509803中，可以证实，在以其短形式的PDGF-BB和聚合物之间的复合物的形成尤其使得能够增加非常疏水的该蛋白质的溶解度。

然而，以其短形式的PDGF-BB与肝素的结合为PDGF-AA的1/100(Lustig F等人，Journal of Molecular Recognition，1999，12，112-120)，因此，不可以将其认为是属于HBP家族的生长因子。

在已知相对亲水的FGF的情况下，可以证实，形成与聚合物的复合物可以有助于其细胞活性(Rouet等人，Journal of BiomedicalMaterials research，2006，78A，792-797)，但所使用的聚合物是硫酸化的，因为它们通过硫酸苄胺进行官能化并因此具有与药物制剂不相容的抗凝活性。

Logeart-Avramoglou D等人在Biomedical Pharmacology 2002，63，129-137的文章中还描述了通过苄胺和/或硫酸盐进行修饰的右旋糖酐。处于溶液中的这些聚合物与TGFβ1形成复合物，如在通过凝胶电泳的相互作用测试中所显示的。然而，非硫酸化的聚合物即使在大于2000的比率下也不表现出真正的相互作用。在硫酸化的聚合物的情况下，对于具有抗凝特性的高度硫酸化的聚合物，可以证明相互作用。

此外，还已知，苄胺可以具有某种毒性，并且可以损害在前面提及的两个专利中所描述的聚合物的生物相容性。

治疗目的的蛋白质的盖仑氏制剂应当必须满足赋形剂的无害的要求，并且为了达到这些要求，必要的是，使用生物相容的化合物，但还限制其相对于活性成分而言的量。

HBP属于八个蛋白质家族，它们具有非常不同的大小、生物化学特性和活性，然而它们都能够以复合物的形式与肝素相联合(Bernfield M.等人，Annu.Rev.Biochem.，1999，68，729-777)。

在这些蛋白质中，包括尤其属于下列家族的蛋白质：

-激素，

-生长因子。

可以将这些不同的家族定义如下：

“激素”意指由内分泌系统产生的信使蛋白质。在通过血液或淋巴液运送遍及整个生物体或者运送到生物体外部后，这些蛋白质随后远距离地起作用。在激素之中，包括生长激素(hGH：人生长激素)和甲状旁腺激素(PTH)。

“生长因子”意指通常在生物体中产生的蛋白质，其刺激细胞的增殖或其分化。在生长因子之中，包括诸如下列的蛋白质：转化生长因子β1和β2(TGF-β)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)、肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF：肝素结合性EGF-样生长因子)、成纤维细胞生长因子1至14(FGF)、角质形成细胞生长因子(KGF)、神经生长因子β(NGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、胎盘生长因子(PIGF)、R-spondin 1至4、和血管内皮生长因子A和B(VEGF)。

所描述的所有复合物均用与肝素具有结构或生物学相似性的聚合物来制备。

通过本发明所解决的问题是，鉴定出了非常有限的生物相容性多糖家族，这些生物相容性多糖能够与HBP形成复合物，以便尤其是，使其稳定并增加其溶解度，而该聚合物不具有肝素的抗凝生物学活性。