[发明专利]增加样本和/或靶通量的测定方法

权利要求书

1.一种用于检测多个样本中的多个靶核酸的测定方法，所述方法包括：

提供在测定前混合在一起的S个样本，其中S是大于1的整数；

使所述S个样本的每一个分别进行编码反应，所述编码反应产生一系列T个带标签的靶核苷酸序列，每个带标签的靶核苷酸序列包括样本特异的核苷酸标签和靶核苷酸序列；其中T是待检测的靶核酸的数目，T是大于1的整数；

对于所述S个样本的每一个，将带标签的靶核苷酸序列混合形成测定混合物；

对所述测定混合物或其等分试样用S×T对独特的扩增引物进行扩增，其中每对扩增引物包括：

会与靶核苷酸序列退火的正向或反向扩增引物；和

会与样本特异性核苷酸标签退火的各自的反向或正向扩增引物；并且

对于每对独特的引物，确定扩增产物是否存在于扩增混合物或其等分试样中，从而扩增产物的存在指示具体靶核酸在具体样本中的存在。

2.权利要求1的方法，其中：

所述编码反应包括使用针对每个样本的不同正向和反向预扩增引物系列分别预扩增所述S个样本的每一个来产生预扩增样本，其中

每个预扩增引物系列包括T对正向和反向预扩增引物，其中每对预扩增引物能够扩增一个具体的靶核酸；并且

在给定系列中的所有正向预扩增引物或所有反向预扩增引物包括共同的样本特异性核苷酸标签；

所述混合包括将所述S个样本的每一个的预扩增样本混合来形成测定混合物；

所述扩增包括将所述测定混合物分成最多S×T个扩增混合物，并且用独特的扩增引物对来分别扩增所述每个扩增混合物，其中所述每对扩增引物包括：

会与靶核苷酸序列退火的正向或反向扩增引物；和

会与样本特异性核苷酸标签退火的各自的反向或正向扩增引物；并且

所述确定包括确定扩增产物是否存在于所述扩增混合物中，从而扩增产物在扩增混合物中的存在指示具体靶核酸在具体样本中的存在。

3.权利要求2的测定方法，其中一个系列中的每个正向预扩增引物除包括靶特异性核苷酸序列外还包括共同的样本特异性核苷酸标签，并且每个系列中的每个反向预扩增引物均包括靶特异性核苷酸序列。

4.权利要求2的测定方法，其中一个系列中的每个正向预扩增引物包括靶特异性核苷酸序列，并且每个系列中的每个反向预扩增引物除包括靶特异性核苷酸序列外还包括共同的样本特异性核苷酸标签。

5.一种检测多个样本中的多个靶核酸的测定方法，所述方法包括：

提供在测定前混合在一起的S个样本，其中S是大于1的整数；

对所述S个样本的每一个分别进行编码反应，所述编码反应产生一系列T个带标签的靶核苷酸序列，每个带标签的靶核苷酸序列包括连接至靶核苷酸序列的第一核苷酸标签，所述靶核苷酸序列连接至第二核苷酸标签；其中T是待检测的靶核酸的数目，T是大于1的整数；

对于所述S个样本的每一个，将带标签的靶核苷酸序列混合形成测定混合物；

使用S×T对独特的扩增引物扩增所述测定混合物或其等分试样，其中每对扩增引物包括：

会与第一核苷酸标签退火的正向或反向扩增引物；和

会与第二核苷酸标签退火的各自的反向或正向扩增引物；并且

对于每对独特的引物，确定扩增产物是否存在于扩增混合物或其等分试样中，从而扩增产物的存在指示具体靶核酸在具体样本中的存在。

6.权利要求5的方法，其中：

所述编码反应包括使用针对每个样本的不同正向和反向预扩增引物系列分别对所述S个样本的每一个进行预扩增来产生预扩增样本，其中

每个预扩增引物系列包括T对正向和反向预扩增引物，其中每对预扩增引物能够扩增一个具体的靶核酸；并且

每个正向预扩增引物包括正向核苷酸标签，每个反向预扩增引物包括反向核苷酸标签；

所述混合包括将所述S个样本的每一个的预扩增样本混合形成测定混合物；

所述扩增包括将每个测定混合物分为最多S×T个扩增混合物，并且用独特的扩增引物对分别扩增每个所述扩增混合物，其中每对扩增引物包括：

会与正向核苷酸标签退火的正向扩增引物；和

会与反向核苷酸标签退火的反向扩增引物；并且

所述确定包括确定扩增产物是否存在于所述扩增混合物中，从而扩增产物在扩增混合物中的存在指示具体靶核酸在具体样本中的存在。