[发明专利]抗原特异性细胞毒性T细胞的制备试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及在抗原特异性的细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphoc yte：以下也称为“CTL”)的制备中利用的试剂盒及其使用。本申请基于2008年10月31日申请的日本国专利申请第2008-280786号和2009年7月15日申请的日本国专利申请第2009-166630号主张优先权，这些专利申请的全部内容通过参照来援引。

背景技术

抗原特异性细胞毒性T细胞疗法(CTL疗法)作为下一代的免疫疗法而被期待。CTL疗法中，在生物体外制备抗原特异性CTL。以往，抗原特异性CTL的制备伴随着复杂且繁杂的操作，不得不依靠开放体系培养系统。因此，必须在医疗用等级的培养细胞加工中心(CPC)内配备、管理用于保持等级100(class 100)级别的清洁环境的设施，需要巨大的费用。另外，以往的方法中，使用各种细胞因子，制备时所需要的费用也相当可观。进而，虽说在保持等级100级别的设施中制备，但是利用开放体系的培养伴随安全方面的风险。这样，以往的抗原特异性CTL制备方法中操作性、经济性和安全性成为实用化的很大障碍，只能在有限的设施中实施。

应予说明，本申请人中的一人在在先专利申请(专利文献1)中，提出了兼备简便性和安全性，而且能够以低成本实施的病毒特异性CTL培养系统。该培养系统的主要特征是在抗原特异性的细胞毒性T细胞的诱导、增殖中不利用树突状细胞，在诱导的CTL的分离中使用CD137抗原。

专利文献

专利文献1：国际公开第2008/023786号小册子

发明内容

专利文献1中提出的上述培养系统与以往的系统相比带来了飞跃性的进步。但是，对于各工序中的细胞的操作，没有采用特有的手段、方法，在操作性方面还有改善的余地。另外，虽然指出了不在开放体系、而在封闭体系中培养的重要性，但是没有提供具体的对策。

因此，本发明的课题是谋求抗原特异性CTL的制备中的操作性、经济性和安全性的进一步的改善，促进CTL疗法的实用化。

本申请人以在先专利申请(专利文献1)中报告的培养系统为基础，为了解决上述课题而反复进行了研究。其结果，通过重新研究各工序，并对培养基、培养容器等的形态、操作方法等独自地进行钻研，从而发现了对抗原特异性细胞毒性T细胞的制备极其有用的试剂盒的构成。这样，本发明的发明人进行深入研究，最终完成了本发明，本发明如下。

[1]一种制备试剂盒，其特征在于，是用于抗原特异性细胞毒性T细胞制备方法的制备试剂，上述抗原特异性细胞毒性T细胞制备方法包括：诱导抗原特异性细胞毒性T细胞的第1工序；制备抗原呈递用活化T细胞的第2工序；和使用通过上述第1工序诱导的抗原特异性细胞毒性T细胞和通过第2工序制备的抗原呈递用活化T细胞，使抗原特异性细胞毒性T细胞增殖的第3工序；

作为用于上述第1工序的构成要素，具备：

(1-1)容纳在注入容器中的含抗原肽培养基，

(1-2)至少2个容纳在注入容器中的含IL-2培养基，和

(1-3)密封型培养容器，具备：用于注入另外制备的外周血单核细胞的第1口，用于注入上述含抗原肽培养基的第2口，与上述含IL-2培养基的数量至少是相同数量的、用于注入上述含IL-2培养基的第3口，和用于移出诱导的抗原特异性细胞毒性T细胞的第4口；

作为用于上述第2工序的构成要素，具备：

(2-1)容纳在注入容器中的含抗CD3抗体培养基，

(2-2)至少2个容纳在注入容器中的含IL-2培养基，

(2-3)容纳在注入容器中的含抗原肽培养基，和

(2-4)密封型培养容器，具备：用于注入另外制备的外周血单核细胞的第1口，用于注入上述含抗CD3抗体培养基的第2口，与上述含IL-2培养基的数量至少是相同数量的、用于注入上述含IL-2培养基的第3口，用于注入上述含抗原肽培养基的第4口，和用于移出所制备的抗原呈递用活化T细胞的第5口；

作为用于上述第3工序的构成要素，具备：

(3-1)容纳在注入容器中的用于分离抗原特异性细胞毒性T细胞的培养基，

(3-2)容纳在注入容器中的用于分离抗原呈递用活化T细胞的培养基，

(3-3)第1密封型分离容器，具备：用于移入诱导的抗原特异性细胞毒性T细胞的第1口，排液用的第2口，用于注入上述用于分离抗原特异性细胞毒性T细胞的培养基的第3口，和用于移出分离后的抗原特异性细胞毒性T细胞的第4口，