[发明专利]凝血调节蛋白变体的组合物和使用方法

说明书

本发明涉及医学科学，尤其是用可溶性凝血调节蛋白的变体治疗微血管功能障碍。更具体而言，本发明涉及通过对有需要的患者施用不结合凝血酶的可溶性凝血调节蛋白变体来治疗急性肾损伤中发生的微血管功能障碍。

凝血调节蛋白(TM)是锚着在包括肺、肝和肾的许多器官上的内皮细胞膜表面的糖蛋白，在血管对损伤的应答中发挥重要作用。TM结合凝血酶并调节凝血和炎症激活二者。

TM由5个结构域组成：N端凝集素样结合结构域、由6个EGF样重复组成的表皮生长因子(EGF)结构域、丝氨酸/脯氨酸富集区、跨膜结构域和胞质结构域。已通过缺失胞质和跨膜结构域构建了可溶性TM(sTM)变体。已将TM缺失变体用于确定保留凝血酶结合和随后通过凝血酶-TM复合物切割蛋白C的最小TM片段(EGF样重复4-6)。进行了此TM区的丙氨酸扫描来确定对凝血调节蛋白活性关键的残基(WO 93/25675)。在由EGF4-6组成的多肽内将具体的残基改变为丙氨酸产生在与凝血酶结合时具有改变的辅因子活性的sTM变体。所提出的治疗应用包括抑制血块形成和治疗全身性凝血功能障碍(systemic coagulation disorder)，如弥漫性血管内凝血。但是，由于破坏凝血级联，这类应用具有出血并发症的内在风险。最近，Ikeguchi等(Kidney International，2002，61：490-501)报道了sTM对实验性肾小球肾炎的影响，并得出sTM的抗血栓形成作用有效减弱了血栓形成性肾小球肾炎损伤的结论。

急性肾损伤(AKI)是指由肾微血管系统的急性损伤引起病症的一般术语。此微血管功能障碍可以与感染/炎症、缺血性损伤、造影剂或化疗相关。AKI一般表征为肾小球滤过率突然下降、氮废物累积和肾不能调节电解质和水平衡。

尽管在护理罹患AKI的患者中的技术进步和在理解疾病过程的病理生理学中的改善，但仍然存在与此病症相关的高发病率和死亡率。最近的AKI治疗剂试验尚未取得成功。因此，存在对安全且有效的AKI治疗的未得到满足的医学需要。

意外地，申请人已发现，在AKI的体内实验模型中，不结合凝血酶的可溶性凝血调节蛋白变体对保护肾免受损伤尤其有效。不结合凝血酶的可溶性凝血调节蛋白变体提供了潜在的重要备选方法来预防和治疗AKI，而无潜在的可以由凝血级联的调节引起的出血并发症。

本发明提供在有需要的患者中治疗AKI的方法，其包括对该患者施用有效量的不结合凝血酶的sTM变体，其中对于在实施例3中所述的BIAcore测定条件下的凝血酶结合，该变体对具有＞4300的Kd值。此方法优选的sTM变体包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明还提供在易感AKI的患者中预防AKI的方法，其包括对该患者施用有效量的不结合凝血酶的sTM变体，其中对于在实施例3中所述的BIAcore测定条件下的凝血酶结合，该变体具有＞4300的Kd值。此方法优选的sTM变体包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明提供用于治疗AKI的不结合凝血酶的sTM变体。

本发明还提供用于治疗AKI的不结合凝血酶的sTM变体，其中对于在实施例3中所述的BIAcore测定条件下的凝血酶结合，该变体具有＞4300的Kd值。此用途优选的sTM变体包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明还提供不结合凝血酶的sTM变体在预防AKI中的用途。

本发明还提供用于预防AKI的不结合凝血酶的sTM变体，其中对于在实施例3中所述的BIAcore测定条件下的凝血酶结合，该变体具有＞4300的Kd值。此用途优选的sTM变体包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明还提供包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的sTM变体。

本发明还提供用作药物的不结合凝血酶的sTM变体，其中该变体包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明还提供用作药物的不结合凝血酶的sTM变体，该变体如SEQID NO：11中所示。

本发明提供用于制备用于治疗AKI的药物的不结合凝血酶的sTM变体。本发明还提供不结合凝血酶的sTM变体在制备用于预防AKI的药物中的用途。此用途优选的sTM变体包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列。

本发明还提供包含具有SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的sTM变体和可药用赋形剂的药物组合物。