[发明专利]用于纯化治疗蛋白的水性两相萃取加强的沉淀方法

权利要求书

1.从多组分混合物中回收并纯化蛋白的方法，所述方法包括：

a.向所述多组分混合物中加入包括聚合物、含不相容阴离子的盐和分配调节盐的相形成组分；

b.混合并完全溶解上述相形成组分以形成正向萃取水性两相体系；

c.回收富聚合物相；

d.使所述富聚合物相与反向萃取缓冲液接触以形成包括含所述蛋白的界面沉淀物的反向萃取水性两相体系；

e.从所述两相体系中回收所述界面沉淀物；和

f.任选地使所述沉淀物再悬浮在再悬浮缓冲液中。

2.权利要求1的方法，其中所述聚合物选自聚乙二醇(PEG)和环氧乙烷-环氧丙烷(EOPO)，所述不相容阴离子选自强烈水合的阴离子，包括磷酸盐、柠檬酸盐和硫酸盐，且所述分配调节盐选自不太强水合的阴离子，包括NaCl和碘化钾(KI)。

3.权利要求2的方法，其中所用聚合物为聚乙二醇(PEG)，所述不相容阴离子为磷酸盐且所述分配调节盐为NaCl。

4.权利要求3的方法，其中在所述两相体系中PEG的浓度为12％-20％(w/w)，磷酸盐的浓度为9％-19％(w/w)且在所述正向萃取水性两相体系中NaCl的浓度为4％-12％(w/w)。

5.权利要求4的方法，其中在所述正向萃取体系中PEG的浓度为15％(w/w)，磷酸盐的浓度为14％(w/w)且NaCl的浓度为12％(w/w)。

6.权利要求3的方法，其中加入进料中的PEG的分子量为1,450Da-6,000Da，诸如分子量为1,500Da。

7.权利要求3的方法，其中所述磷酸盐以单碱式磷酸盐和二碱式磷酸盐的混合物的形式加入。

8.权利要求7的方法，其中所述单碱式磷酸盐选自磷酸二氢钠和磷酸二氢钾，且所述二碱式磷酸盐选自磷酸氢二钠和磷酸氢二钾。

9.权利要求1的方法，步骤(a)，其中将所述相形成组分以粉末形式加入所述进料中。

10.权利要求1的方法，其中所述正向萃取水性两相体系的pH为3.0-9.0，诸如体系pH为6.0。

11.权利要求1的方法，其中在完成相形成组分的溶解之后，将所述正向萃取体系培养10分钟-24小时，诸如30分钟。

12.权利要求1的方法，其中包括病毒的一些杂质收集在在正向萃取或分配到所述正向萃取体系的富盐相中期间形成的沉淀物中。

13.权利要求1的方法，其中步骤(c)的富聚合物相通过以下方式回收：

a.重力沉降所述两相体系，让其完全相分离；接着

b.排出有或没有任何界面沉淀物的底部相或抽吸顶部相。

14.权利要求1的方法，其中步骤(c)的富聚合物相通过以下方式回收：

a.离心分离所述两相体系；接着

b.除去底部相和任何界面沉淀物或抽吸顶部相。

15.权利要求1的方法，其中所述反向萃取缓冲液为浓盐溶液。

16.权利要求15的方法，其中构成所述反向萃取缓冲液的盐的阴离子选自柠檬酸盐、磷酸盐和硫酸盐。

17.权利要求16的方法，其中所述反向萃取缓冲液为浓度为10％(w/w)-40％(w/w)的磷酸盐溶液。

18.权利要求17的方法，其中所述反向萃取缓冲液的pH为3.0-9.0，诸如pH为6.0。

19.权利要求1的方法，其中与来自所述正向萃取的富聚合物相接触的反向萃取缓冲液的体积为来自所述正向萃取的富聚合物相体积的1-2倍。

20.权利要求1的方法，其中在混合之后，将所述反向萃取水性两相体系培养5分钟-15分钟，诸如10分钟。

21.权利要求1的方法，其中在所述反向萃取期间形成的沉淀物通过以下方式回收并再悬浮：

a.过滤反向萃取体系；

b.在膜表面上捕获沉淀物；和

c.用再悬浮缓冲液冲洗膜以使抗体沉淀物再悬浮并收集滤液。

22.权利要求21的方法，其中所述再悬浮缓冲液跨越并穿过所述膜再循环以实现沉淀物再溶解。