[发明专利]通过非病毒重编程获得的多潜能干细胞

权利要求书

1.一种重编程灵长类体细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

在足以重编程所述细胞的条件下将所述灵长类体细胞暴露于多种潜能决定因子；和

培养所述暴露细胞来获得具有比所述灵长类体细胞更高的潜能水平的重编程细胞，所述重编程细胞基本不含与将所述潜能决定因子暴露于所述体细胞有关的任何成分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述灵长类体细胞是从胎儿或出生后个体中获得的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述灵长类是人类。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述重编程细胞在遗传上与胎儿或出生后个体相同。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述暴露步骤包括引入至少一种将一种或多种潜能决定因子编码到所述灵长类体细胞中的载体的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述载体是非病毒附加型载体。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述一种或多种潜能决定因子包括人类OCT-4、人类SOX2、人类LIN28、人类NANOG、人类c-Myc和人类KLF4，其中当所述载体包含c-Myc时，所述方法进一步包括将所述灵长类体细胞暴露于SV40T抗原的步骤。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述至少一种载体是单一载体。

9.根据权利要求所述的方法，其中所述单一载体包含至少一个内部核糖体进入位点。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述单一载体依次包含第一启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第二启动子、SV40T抗原、IRES2和KLF4。

11.根据权利要求8所述的方法，其中所述载体依次包含第一启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第二启动子、c-Myc、IRES2、KLF4、第三启动子、NANOG、IRES2和LN28。

12.根据权利要求5所述的方法，其中第一载体依次包含第一启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第二启动子、SV40 T抗原、IRES2和KLF4，其中第二载体依次包含第三启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第四启动子、NANOG、IRES2和KLF4，并且其中第三载体依次包含第五启动子、c-Myc、IRES2和LN28，其中所述启动子不必相同。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述第一、第二、第三和第四启动子中的每一个均是延伸因子1α(EF1α)基因启动子。

14.根据权利要求5所述的方法，其中第一载体依次包含第一启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第二启动子、KLF4、IRES2、c-Myc、第三启动子、NANOG、IRES2和LN28。其中第二载体依次包含第四启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第五启动子、SV40 T抗原、IRES2和KLF4，其中所述启动子不必相同。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第一、第三、第四和第五启动子中的每一个均是EF1α基因启动子，并且其中所述第二启动子是巨细胞病毒即刻早期基因(CMV)启动子。

16.根据权利要求5所述的方法，其中第一载体依次包含第一启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第二启动子、NANOG、IRES2和LN28，其中第二载体依次包含第三启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第四启动子、SV40 T抗原、IRES2和KLF4，并且其中第三载体依次包含第五启动子、OCT4、IRES2、SOX2、第六启动子、c-Myc、IRES2和KLF4，其中所述启动子不必相同。

17.一种富集的灵长类多潜能细胞群体，其根据包括以下步骤的方法来产生：

在足以表达所述潜能决定因子的条件下将灵长类体细胞暴露于多种潜能决定因子，从而重编程所述体细胞来产生所述灵长类多潜能细胞；

所述细胞基本不含与将所述潜能决定因子暴露于所述体细胞有关的任何成分。

18.根据权利要求17所述的群体，其中所述灵长类体细胞是从胎儿或出生后个体中获得的。

19.根据权利要求17所述的群体，其中所述灵长类是人类。