[发明专利]基因沉默治疗剂的脂质体有效递送方法和组合物

权利要求书

1.一种制备包含活性剂的组合物的方法，所述方法包括：

a)提供第一流体，所述第一流体包含活性剂的含水缓冲溶液；

b)提供第二流体，所述第二流体包含处于有机溶剂中的一种或多种脂质体形成化合物的非水溶液；

c)使所述第一流体与所述第二流体撞击，由此形成所述有机溶剂浓度为约20％至约50％v/v且pH为约6至约7.4的撞击流体；

d)在收集容器中于约20℃至约35℃的温度下温育所述撞击流体约0.5小时至约8小时，由此形成含有脂质体的温育物。

2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括通过向所述温育物中加入足以使所述有机溶剂的浓度小于约20％v/v的缓冲剂而使所述温育物淬火。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂质体形成化合物为一种或多种DILA2氨基酸化合物。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂质体形成化合物中的一种为PONA，即C18:1-正Arg-C16。

5.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述第一流体的体积流率是所述第二流体的体积流率的两倍或更高。

6.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述第一流体的体积流率是所述第二流体的体积流率的三倍或更高。

7.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述第一流体的体积流率是所述第二流体的体积流率的五倍或更高。

8.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述撞击流体的pH调节为约3至约6。

9.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在约3至约6的pH下温育。

10.如权利要求1所述的方法，其进一步包括向所述收集容器加入缓冲剂以调节所述有机溶剂的浓度。

11.如权利要求1所述的方法，其进一步包括所述活性剂以大于约50％的水平被包裹在脂质体中。

12.如权利要求1所述的方法，其进一步包括所述活性剂以大于约70％的水平被包裹在脂质体中。

13.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性剂为基因沉默剂、基因调节剂、反义试剂、肽核酸试剂、核酶试剂、RNA试剂或DNA试剂。

14.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性剂为UsiRNA。

15.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性剂为药物化合物。

16.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂质体组合物在45℃的温度下保持基因沉默活性达7天。

17.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂质体组合物在45℃的温度下保持包裹所述活性剂达7天。

18.如权利要求1所述的方法，其中，在切向流过滤后，所述脂质体尺寸均一，其直径小于约160nm。

19.如权利要求1所述的方法，其中，在切向流过滤后，所述脂质体尺寸均一，其平均直径为约40nm至约160nm。

20.如权利要求1所述的方法，其中，在切向流过滤后，所述脂质体尺寸均一，其平均直径为约80nm至约150nm。

21.如权利要求1所述的方法，其进一步包括通过切向流过滤和渗滤过滤所述温育物。

22.如权利要求1所述的方法，其进一步包括对所述温育物进行灭菌。

23.如权利要求1所述的方法，其进一步包括用不同的药学上可接受的缓冲剂交换所述有机溶剂。

24.如权利要求1所述的方法，其进一步包括向所述第一流体中加入有机溶剂使其浓度为约1％至约40％v/v。

25.如权利要求1所述的方法，其中，所述有机溶剂为(C1-6)烷醇浓度为约40％至约99％v/v的注射用无菌水溶液。

26.如权利要求1所述的方法，其中，所述有机溶剂为(C1-6)烷醇浓度为约70％至约95％v/v的注射用无菌水溶液。

27.如权利要求1所述的方法，其中，所述温育时间为约1小时至约4小时。