[发明专利]采用RNP基序构建蛋白应答shRNA/RNAi控制体系

说明书

技术领域

本发明涉及采用RNP基序构建蛋白应答shRNA和RNAi控制体系。

背景技术

RNA干扰(下文中称为RNAi)是通过以序列特异性方式分裂mRNA来短暂地抑制翻译的现象。已在各种生物种中建立称为敲落(knockdown)的方法，其通过引入RNA双链体如短发夹RNA(下文中称为shRNA)来引起这种RNAi。从其作为短暂抑制基因表达的方便且有效的方法被发现以来，在短短10年的时间内，RNAi已普遍传播，包括其在医学治疗上的应用的研究。然而，其机制或引入技术仍有待发展。此外，现在RNAi的主题围绕使得敲落强有效的研究或开发用于将RNA输送到重要部位的输送技术。

Chung等人已制备人工RNA，其中已知为咖啡因样低分子量化合物的茶碱的结合部位已被引入shRNA的环部分并揭示了RNAi浓度依赖性地受到茶碱抑制(参见非专利文献1)。

非专利文献1：Chung-Il An，Vu B.Trinh和Yohei Yokobayashi，RNA，May 2006；12：710-716

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的是采用RNP提供RNAi控制体系以采用RNA或蛋白作为抑制剂来新设计和制备翻译控制机制并将这种人工翻译控制体系结合到活体内。

用于解决问题的方案

已完成本发明来达到所述目的。具体地讲，根据一个实施方案，本发明涉及shRNA，其包括：具有与靶序列互补的序列的引导链；过客链，所述过客链与所述引导链形成双链体；和连接链，所述连接链连接所述引导链与所述过客链，其中所述连接链包括RNP衍生的蛋白结合基序序列。在本说明书中，这种shRNA也称为传感shRNA。

优选所述RNP衍生的蛋白结合基序序列应为Box C/D序列。

根据一个供选方面，本发明涉及RNAi控制体系，其包括：所述传感shRNA；和RNP衍生的蛋白，所述RNP衍生的蛋白特异性结合到所述shRNA中的蛋白结合基序序列。

根据一个供选方面，本发明涉及RNAi控制体系，其包括：用于表达所述传感shRNA的载体；和用于表达RNP衍生的蛋白的载体，所述RNP衍生的蛋白特异性结合到所述shRNA中的蛋白结合基序序列。

根据另一供选方面，本发明涉及RNAi控制方法，其包括如下步骤：在溶液中使所述传感shRNA与RNP衍生的蛋白接触，所述RNP衍生的蛋白特异性结合到所述shRNA中的蛋白结合基序序列；和将包含所述shRNA和所述蛋白的所述溶液引入细胞中。

根据另一供选方面，本发明涉及细胞内RNAi控制方法，其包括如下步骤：将用于表达所述传感shRNA的载体进入细胞中；将用于表达RNP衍生的蛋白的载体引入所述细胞中，所述RNP衍生的蛋白特异性结合到所述shRNA中的蛋白结合基序序列；和从用于表达所述shRNA的所述载体和用于表达所述蛋白的所述载体引起它们的表达。

根据另一供选方面，本发明提供应答细胞中表达的蛋白的RNAi控制体系，所述体系包括：所述传感shRNA或用于表达所述shRNA的载体，所述传感shRNA中RNP衍生蛋白结合基序序列是特异性结合到所述细胞中表达的所述蛋白的序列，还提供应答细胞中表达的蛋白的RNAi控制方法，所述方法包括如下步骤：将所述传感shRNA或用于表达所述shRNA的载体引入细胞中，所述传感shRNA中RNP衍生的蛋白结合基序序列是特异性结合到所述细胞中表达的所述蛋白的序列。

根据另一供选方面，本发明提供所述RNAi控制体系，其控制凋亡调节蛋白的表达，其中所述shRNA的靶序列为Bcl-xL mRNA，还提供使用所述shRNA的人工蛋白信息转化体系，其中特异性结合到RNP衍生的蛋白结合基序序列的蛋白的信息被转化成由所述shRNA的靶序列的RNA编码的蛋白的信息。

发明的有益效果