[发明专利]免疫刺激性寡核苷酸

说明书

技术领域

本发明涉及免疫刺激性寡核苷酸以及使用免疫刺激性寡核苷酸来诱导抗原特异性免疫应答的方法。

背景技术

细菌DNA具有活化B细胞和天然杀伤细胞的免疫刺激性效应，但脊椎动物DNA无此效应(Tokunaga，T.等人，1988.Jpn.J.Cancer Res.79：682-686；Tokunaga，T.等人，1984，JNCI 72：955-962；Messina，J.P.等人，1991，J.Immunol.147：1759-1764；且综述于Krieg，1998，Applied Oligonucleotide Technology，C.A.Stein及A.M.Krieg(Eds.)，John Wiley and SonsInc.，New York，N.Y.，pp.431-448)。现已知细菌DNA的这些免疫刺激性效应是在特定碱基背景中存在未甲基化的CpG二核苷酸(CpG基序)的结果，该基序在细菌DNA中常见，但其在脊椎动物DNA中被甲基化且比率不足(Krieg等人，1995 Nature 374：546-549；Krieg，1999 Biochim.Biophys.Acta 1489：107-116)。可以用含有这些CpG基序的合成寡脱氧核苷酸(ODN)来模拟细菌DNA的免疫刺激性效应。此类CpG ODN对人类及鼠类白细胞具有高刺激性效应，其诱导B细胞增殖；细胞因子及免疫球蛋白分泌；天然杀伤(NK)细胞裂解活性及IFN-γ分泌；以及活化树突细胞(DC)及其它抗原呈递细胞以表达共刺激分子并分泌细胞因子，特别是在促进Th1样T细胞应答的发展中很重要的Th1样细胞因子。天然磷酸二酯骨架CpG ODN的这些免疫刺激性效应是高度CpG特异的，因为在CpG基序被甲基化、变为GpC、或以其它方式被去除或改变时所述效应显著降低(Krieg等人，1995 Nature 374：546-549；Hartmann等人，1999 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：9305-10)。

此前已有报导，CpG寡核苷酸的免疫刺激性活性取决于CpG基序的数量、CG二核苷酸两侧的序列、CpG基序的位置及CpG基序之间的间隔(Ballas等人，1996，J.Immunol.157(5)：1840-5；Hartmann等人，2000，J.Immunol.，164(3)：1617-24；Klinman等人，2003，Clin.Exp.Immunol.，133(2)：227-32)。本文公开了3′CpG基序被移除的免疫刺激性寡核苷酸，其令人惊讶地仍保留其免疫刺激性活性。本文还公开了包含所述免疫刺激性寡核苷酸和抗原的疫苗，以及使用该疫苗的方法。

发明简述

在本发明各方面中，提供了包含核苷酸序列5′TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3′(SEQ ID NO：1)的免疫刺激性寡核苷酸。在一些实施方案中，免疫刺激性寡核苷酸包含一或多个经修饰的键。在某些实施方案中，免疫刺激性寡核苷酸包含一或多个硫代磷酸酯键。在某些实施方案中，寡核苷酸所有的核苷酸间键均为硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，免疫刺激性寡核苷酸包含至少一个亲脂性经取代的核苷酸类似物以及嘧啶-嘌呤二核苷酸。