[发明专利]生物灭菌指示组合物、制品和方法

说明书

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2008年10月17日提交的美国临时申请号61/196414的权益，该临时申请以引用方式全文并入本文。

背景技术

主要在卫生保健行业中，但同样在许多其他行业应用中，有必要对用于器材如医疗器械、仪器和其他非一次性制品进行灭菌的过程的有效性进行监控。在这些情形中，灭菌一般定义为完全破坏包括诸如病毒和孢子的结构在内的所有的活微生物的过程。作为标准操作，医院会将灭菌状况指示器与一批物品放在一起以测试灭菌过程的致死率。生物灭菌指示器和化学灭菌指示器都一直得到利用。

标准类型的生物灭菌指示器包括已知数量的试验微生物，例如嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)孢子，这些孢子对灭菌过程的抵抗力比大多数污染性生物强许多倍。在指示器暴露于灭菌过程后，将孢子在营养培养基中进行温育，以确定是否有任何孢子从该灭菌过程存活下来，如有孢子长出则表明灭菌过程不足以破坏所有的微生物。在另一个例子中，在进行了灭菌过程后，测定可与孢子存活力相关联的酶的活性。尽管这方面已取得了进展，但进行确切测定所需的时间可能过长。

现有的化学灭菌指示器可在灭菌过程结束时立即进行读数。但是，结果仅表明存在某种特定条件，例如表明存在某种特定化学品或一定时间段的某个温度。

通常认为，活生物对所有实际存在的条件的反应，是检验灭菌过程实现灭菌有效性的更直接可靠的试验。因此，对于能指示灭菌过程的有效性而在灭菌过程完成后又没有过长的延迟时间的生物灭菌指示器，一直存在着需求。

发明内容

本发明提供生物灭菌组合物、包含该组合物的灭菌指示器以及用该指示器确定灭菌过程的有效性的方法。该组合物包含能抵抗灭菌过程的、在其萌发和初始长出期间含有活性蛋白酶的孢子，例如从灭菌过程存活下来的孢子。在某些实施例中，该活性蛋白酶如果存在的话，可在一段短的温育时间期间和/或之后被检测到。该活性蛋白酶是在标记的蛋白酶底物的存在下检测到的。该底物标记有一种或多种染料基团，所述染料基团中的至少一种在该底物的肽部分被该活性蛋白酶切割时会发生可检测的变化。该标记的蛋白酶底物至少在用于温育所述孢子的温度下是稳定的，并且在某些实施例中，优选在灭菌温度下是稳定的。

因此，在一个实施例中，提供灭菌指示组合物，其包含：

多个灭菌过程抗性孢子，所述孢子在其萌发和初始长出期间含有活性蛋白酶；

包含至少一种标记的蛋白酶底物和至少一种供所述孢子萌发的营养物的萌发培养基；

其中该培养基基本上不含a)该多个孢子所含的活性蛋白酶以外的任何活性蛋白酶，和b)该至少一种标记的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物、任何来源于该多个孢子的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物、以及任何不与该标记的蛋白酶底物竞争该活性蛋白酶的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物；并且

其中该至少一种标记的蛋白酶底物包含能被该活性蛋白酶切割且标记有一种或多种染料基团的肽，所述染料基团中的至少一种在该肽被该活性蛋白酶切割时会发生可检测变化，并且其中该标记的蛋白酶底物至少在用于温育所述孢子的温度下是稳定的。

在另一个实施例中，提供灭菌过程指示器，其包含：

载体，其承载多个灭菌过程抗性孢子，所述孢子在其萌发和初始长出期间含有活性蛋白酶；

微生物不能透过并且不能透过灭菌剂的容器，该容器含有萌发培养基，该萌发培养基包含至少一种标记的蛋白酶底物和至少一种供所述孢子萌发的营养物；

其中该培养基基本上不含a)该多个孢子所含的活性蛋白酶以外的任何活性蛋白酶，和b)该至少一种标记的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物、任何来源于该多个孢子的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物、以及任何不与该标记的蛋白酶底物竞争该活性蛋白酶的蛋白酶底物以外的任何蛋白酶底物；并且

其中该至少一种标记的蛋白酶底物包含能被该活性蛋白酶切割且标记有一种或多种染料基团的肽，所述染料基团中的至少一种在该肽被该活性蛋白酶切割时会发生可检测变化，并且其中该标记的蛋白酶底物至少在用于温育所述孢子的温度下是稳定的；并且

其中该载体靠近该容器并且与该萌发培养基隔开。

在又一个实施例中，提供确定灭菌过程的有效性的方法，该方法包括：

提供灭菌过程指示器，其包含：

载体，其承载多个灭菌过程抗性孢子，所述孢子在其萌发和初始长出期间含有活性蛋白酶；