[发明专利]用于生产β-檀香萜的方法

权利要求书

1.一种生产β-檀香萜的方法，包含：

a)使FPP与至少一种具有β-檀香萜合酶活性的多肽接触，该多肽包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少50％同一性的氨基酸序列；

b)非强制选择地，分离在步骤a)中产生的β-檀香萜。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤a)包含在有利于生产β-檀香萜的条件下培养能够生产FPP并且经转化以表达至少一种多肽的非人宿主生物体或细胞，其中该多肽包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少50％同一性的氨基酸序列并且具有β-檀香萜合酶活性。

3.权利要求2所述的方法，其中该方法还包含在步骤a)之前用至少一种编码多肽的核酸将能够生产FPP的非人生物体或细胞转化以使所述生物体表达所述多肽，该多肽包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少50％同一性的氨基酸序列并且具有β-檀香萜合酶活性。

4.权利要求3所述的方法，其中所述至少一种编码β-檀香萜合酶的核酸包含与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4或它们的补体有至少50％、优选至少60％、优选至少70％、优选至少90％同一性的核苷酸序列。

5.权利要求2～4中任一项所述的方法，其中非人宿主生物体为植物、原核生物或真菌。

6.权利要求5所述的方法，其中非人宿主生物体为微生物，优选细菌或酵母。

7.权利要求6所述的方法，其中所述细菌为大肠杆菌并且所述酵母为酿酒酵母。

8.具有β-檀香萜合酶活性并且包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少50％同一性的氨基酸序列的多肽。

9.编码权利要求8所述的多肽的核酸。

10.权利要求9所述的核酸，其包含与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4或它们的补体有至少50％、优选至少60％、优选至少70％、优选至少90％同一性的核苷酸序列。

11.表达载体，其包含权利要求9或10所述的核酸。

12.经转化以包藏至少一种权利要求9或10所述的核酸的非人宿主生物体或细胞，从而其异源表达或过表达至少一种权利要求8所述的多肽。

13.权利要求12所述的非人宿主生物体，其中所述非人宿主生物体为植物、原核生物或真菌。

14.权利要求13所述的非人宿主生物体，其中所述非人宿主生物体为微生物，优选细菌或酵母。

15.权利要求14所述的非人宿主生物体，其中所述细菌为大肠杆菌并且所述酵母为酿酒酵母。

16.一种生产至少一种权利要求8所述的多肽的方法，包含：

a)培养用权利要求11所述表达载体转化的非人宿主生物体或细胞，以便使其包藏权利要求9或10所述的核酸并且表达或过表达权利要求8所述的多肽；

b)从在步骤a)中培养的非人宿主生物体或细胞中分离该多肽。

17.权利要求16所述的方法，其进一步包含在步骤a)之前，用权利要求11所述的表达载体转化非人宿主生物体或细胞，以便使其包藏权利要求9或10所述的核酸并且表达或过表达权利要求8所述的多肽。

18.一种制备具有β-檀香萜合酶活性的变体多肽的方法，该方法包含步骤：

(a)选择权利要求9或10所述的核酸；

(b)修饰所选择的核酸以获得至少一种突变核酸；

(c)用突变核酸序列转化宿主细胞或单细胞生物体以表达用该突变核酸序列编码的多肽；

(d)按照至少一种修饰的性质筛选该多肽；和，

(e)非强制选择地，如果该多肽不具有期望的变体β-檀香萜合酶活性，则重复步骤(a)至(d)直到获得具有所期望的变体β-檀香萜合酶活性的多肽；

(f)非强制选择地，如果在步骤(d)中鉴别出具有所期望的变体β-檀香萜合酶活性的多肽，则分离在步骤(c)中获得的相应突变核酸。