[发明专利]通过重组酵母口服/粘膜接种疫苗的方法

权利要求书

1.通过重组酵母口服/粘膜接种疫苗的方法，特征在于通过使用遗传工程的方法产生一种酵母菌株，其使外源基因能够定向整合以及使外源蛋白能够表达。

2.权利要求1的方法，特征在于能够产生酵母菌株的重组变体。

3.权利要求1和2的方法，特征在于产生乳酸克鲁维氏(Kluyveromyces lactis)酵母的重组菌株。

4.权利要求1-3的方法，特征在于产生乳酸克鲁维氏酵母的重组菌株并用作表达系统。

5.权利要求1-4的方法，特征在于产生乳酸克鲁维氏酵母的重组变体，其允许可诱导的外源基因表达。

6.乳酸克鲁维氏酵母的菌株VAK367-D4及该菌株的变体。

7.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因的整合在没有额外的载体序列或选择性标记的情况下进行。

8.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因表达是组成性的。

9.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于可通过内源报道基因的表达间接地对所述外源基因表达进行定量。

10.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因使具有抗原特性的蛋白能够表达。

11.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因使具有抗原特性的病毒蛋白能够表达。

12.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因使病毒的结构蛋白能够表达。

13.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因使黄病毒科(Flaviviridae)、双核糖核酸病毒科(Birnaviridae)和正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的病毒结构蛋白能够表达。

14.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于所述外源基因使牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的结构蛋白能够表达。

15.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于权利要求1至6的重组酵母菌株变体可诱导地或组成性地表达大量的蛋白或该蛋白的结构域或该蛋白与不同种蛋白结构域融合的结构域。

16.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于使外源蛋白能生化合成。

17.根据一或多种上述权利要求中方法生产疫苗的方法，特征在于其在低温运输系统外具有长保存期。

18.一或多种上述权利要求中的方法，特征在于通过施用权利要求1至6的一种重组菌株的完整酵母细胞，产生针对表达的外源蛋白的特异性免疫。

19.权利要求17的方法，特征在于通过吸入、支气管、口服、鼻部施用权利要求1至6的一种重组菌株的完整酵母细胞，而产生针对表达的外源蛋白的特异性免疫。

20.权利要求17的方法，特征在于，权利要求1至6中的一种重组菌株的完整酵母细胞的施用，也可以用其它方式进行。

21.权利要求17-19的方法，特征在于生化合成的外源蛋白使得能够产生特异性免疫。

22.特异性的ELISA方法，用于对针对上述权利要求之一中蛋白的免疫应答进行探测和定量。

23.根据权利要求17的ELISA方法，用于对针对BVDV E2蛋白的免疫应答进行探测和定量。

24.用于检测来自个体血清的中和抗体的方法，其中所述个体由上述权利要求之一中的方法免疫。

25.用于检测针对来自个体血清的BVDV E2蛋白的中和抗体的方法，其中所述个体由上述权利要求之一中的方法免疫。

26.在用抗原攻击后对上述权利要求之一中的免疫进行检测的方法。

27.在用病毒抗原攻击后对上述权利要求之一中的免疫进行检测的方法。

28.在用BVDV E2攻击后对上述权利要求之一中的免疫进行检测的方法