[发明专利]嵌合DNA聚合酶无效
| 申请号： | 200980151063.4 | 申请日： | 2009-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN102257136A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 比亚内·弗尔霍尔姆;保罗·迈克瓦恩;威廉·布尔恩;加文·拉什 | 申请（专利权）人： | 卡帕生物系统 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 李丙林;张英 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嵌合 dna 聚合 | ||
1.一种嵌合聚合酶，包括：
第一域，具有至少80％相同于在第一DNA聚合酶中发现的氨基酸序列的序列，所述第一DNA聚合酶的特征在于高持续合成能力、延伸率、抗盐性、热稳定性或TMAC耐受性；以及
第二域，具有至少80％相同于在第二DNA聚合酶中发现的氨基酸序列的序列，所述第二DNA聚合酶的特征在于高保真性，其中，所述嵌合聚合酶的特征在于高保真性和高持续合成能力、延伸率、抗盐性、热稳定性或TMAC耐受性。
2.根据权利要求1所述的嵌合聚合酶，其中，所述第一DNA聚合酶选自KOD聚合酶、或TNAl聚合酶、热球菌属9度N-7、T4、T7或phi29。
3.根据权利要求2所述的嵌合聚合酶，其中，所述第一DNA聚合酶是KOD聚合酶。
4.根据权利要求1所述的嵌合聚合酶，其中，所述第二DNA聚合酶选自分离自激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)、深海热球菌(P.abyssi)、T.gorgonarius、超级嗜热菌(T.litoralis)、速生热球菌(T.zilligii)、热球菌属GT(T.sp.GT)、或火球菌属GB-D(P.sp.GB-D)的聚合酶。
5.根据权利要求4所述的嵌合聚合酶，其中，所述第二DNA聚合酶是Pfu聚合酶。
6.根据权利要求1所述的嵌合聚合酶，其中，所述第一DNA聚合酶是KOD聚合酶而所述第二DNA聚合酶是Pfu聚合酶。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，所述第一域选自由核酸外切酶域、N-末端域、拇指域以及它们的组合组成的组。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，所述第二域是掌域和/或指域。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，在所述第一DNA聚合酶中发现的所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基156至301。
10.根据权利要求9所述的嵌合聚合酶，进一步包括第三域，所述第三域具有至少80％相同于氨基酸序列的序列，所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基26至105。
11.根据权利要求10所述的嵌合聚合酶，进一步包括第四域，所述第四域具有至少80％相同于氨基酸序列的序列，所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基612至749。
12.根据权利要求1-8中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，在所述第一DNA聚合酶中发现的所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基26至105。
13.根据权利要求12所述的嵌合聚合酶，进一步包括第三域，所述第三域具有至少80％相同于氨基酸序列的序列，所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基612至749。
14.根据权利要求1-8中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，在所述第一DNA聚合酶中发现的所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基612至749。
15.根据权利要求14所述的嵌合聚合酶，进一步包括第三域，所述第三域具有至少80％相同于氨基酸序列的序列，所述氨基酸序列对应于KOD聚合酶(SEQ ID NO：11)的氨基酸残基156至301。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的嵌合聚合酶，其中，在所述第二DNA聚合酶中发现的所述氨基酸序列对应于Pfu聚合酶(SEQ ID NO：9)的氨基酸残基394至563。
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