[发明专利]用于产生针对细胞相关抗原如P2X7、CXCR7或CXCR4的免疫球蛋白的基因免疫

权利要求书

1.用于产生可以结合细胞相关抗原和/或具有针对细胞相关抗原的亲和性的免疫球蛋白序列的方法，所述方法包括下述步骤：

a)用编码所述细胞相关抗原或所述细胞相关抗原的结构域或特定部分的核酸基因疫苗接种非人动物；和

b)任选地用采用其天然构象的所述抗原加强所述动物，所述采用其天然构象的抗原选自包括表达所述细胞相关抗原的天然的或转染的细胞的细胞、细胞来源的膜提取物、携带富集抗原的小泡或任何其它膜衍生物、脂质体或表达所述细胞相关抗原的病毒颗粒；

c)筛选来源于所述非人动物的免疫球蛋白序列的组、集合或文库，以获得可以结合所述细胞相关抗原和/或具有针对所述细胞相关抗原的亲和性的免疫球蛋白序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞相关抗原选自跨膜抗原，包括具有多个跨膜结构域的跨膜抗原，其包括但不限于GPCRs或离子通道。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述非人动物选自脊椎动物，诸如鲨鱼，蜥蜴，和哺乳动物，更特别地是骆驼科动物，诸如美洲驼(llama)和羊驼(alpaca)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述非人动物是骆驼科动物或美洲驼。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白序列是轻链可变结构域序列，或重链可变结构域序列。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述免疫球蛋白序列是来源于常规4-链抗体的重链可变结构域序列或来源于重链抗体的重链可变结构域序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白序列是结构域抗体，或适于用作结构域抗体的免疫球蛋白序列，单结构域抗体，或适于用作单结构域抗体的免疫球蛋白序列，″dAbs”，或适于用作dAbs的免疫球蛋白序列，或纳米抗体，包括但不限于V_HH序列或适于用作纳米抗体的免疫球蛋白序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述免疫球蛋白序列是纳米抗体。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中疫苗接种通过无针喷射注射、通过冲击法、通过针头介导的注射如纹身、通过局部施用或通过任意DNA施用方法而后通过体内电穿孔进行。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中疫苗接种通过皮内、肌内或皮下施用DNA进行。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中免疫球蛋白序列的组、集合或文库获自血液、淋巴结、脾、骨髓或携带编码所述非人哺乳动物的这些免疫球蛋白序列的细胞的任何组织。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述细胞相关抗原在允许表达天然构象的靶标的任何细胞上表达，所述细胞诸如但不限于选自下列的细胞：Cho，Cos7，Hek293，或骆驼科动物来源的细胞，诸如美洲驼来源的细胞或羊驼来源的细胞。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述细胞相关抗原是跨膜抗原，诸如例如GPCR和/或离子通道。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述抗原选自CXCR7，CXCR4或/和P2X7。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白序列的组、集合或文库在细胞或病毒的组、集合或样品上表达，并且筛选所述细胞的组、集合或样品，以获得表达可以结合所述细胞相关抗原和/或具有针对所述细胞相关抗原的亲和性的免疫球蛋白序列的细胞。

16.根据权利要求15所述的方法，其中从所述细胞或病毒纯化和/或分离编码可以结合所述细胞相关抗原和/或具有针对所述细胞相关抗原的亲和性的免疫球蛋白序列的核酸序列，然后表达所述免疫球蛋白序列。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中免疫球蛋白序列的组、集合或文库由核酸序列的组、集合或文库编码，并且筛选所述核酸序列的组、集合或文库，以获得编码可以结合所述细胞相关抗原和/或具有针对所述细胞相关抗原的亲和性的免疫球蛋白序列的核酸序列。