[发明专利]与IL-12结合的抗体及其纯化方法

权利要求书

1.一种用于从包括抗体和至少一种宿主细胞蛋白质（HCP）的样品混合物中产生宿主细胞蛋白质减少的抗体制剂的方法，所述方法包括：

（a）对所述样品基质实施pH的减少，从而形成初步回收样品，其中所述pH的减少是至3 – 4；

（b）将所述初步回收样品调整至约4.5 – 6的pH，随后将所述初步回收样品应用于离子交换树脂，且收集离子交换样品；

（c）将所述离子交换样品应用于疏水作用层析（HIC）树脂且收集HIC样品，其中所述HIC样品包括所述HCP减少的抗体制剂。

2.权利要求1的方法，其中所述pH的减少通过使合适的酸与所述样品混合物混合来完成，并且其中所述合适的酸选自柠檬酸、乙酸、辛酸等。

3.权利要求1的方法，其中所述离子交换树脂是阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。

4.权利要求3的方法，其中所述离子交换树脂是阳离子交换树脂。

5.权利要求4的方法，其中所述阳离子交换树脂选自羧甲基（CM）、磺乙基（SE）、磺丙基（SP）、磷酸盐（P）和磺酸盐（S）。

6.权利要求5的方法，其中所述阳离子交换树脂是羧甲基。

7.权利要求3的方法，其中所述离子交换树脂是阴离子交换树脂。

8.权利要求7的方法，其中所述阴离子交换树脂选自Q Sepharose、二乙氨乙基（DEAE）、季氨乙基（QAE）和季胺（Q）基团。

9.权利要求8的方法，其中所述阴离子交换树脂是Q-Sepharose。

10.权利要求1的方法，其中所述离子交换步骤包括第一个离子交换步骤和第二个离子交换步骤。

11.权利要求10的方法，其中所述第一个离子交换步骤是阳离子交换步骤，随后为第二个阴离子交换步骤。

12.权利要求10的方法，其进一步包括中间步骤，其中所述中间步骤是在所述第一个和所述第二个离子交换步骤之间发生的过滤步骤。

13.权利要求12的方法，其中所述过滤步骤通过捕获超滤/渗滤完成。

14.权利要求1的方法，其中所述HIC使用包括一种或多种疏水基团的柱完成。

15.权利要求14的方法，其中所述一种或多种疏水基团选自烷基、芳基基团及其组合。

16.权利要求14的方法，其中所述柱选自苯基琼脂糖（例如Phenyl Sepharose? 6 Fast Flow柱、Phenyl Sepharose? High Performance柱），Octyl Sepharose? High Performance柱，Fractogel? EMD Propyl，Fractogel? EMD Phenyl柱，Macro-Prep? Methyl，Macro-Prep? t-Butyl Supports，WP HI-Propyl（C₃）?柱，和Toyopearl?醚、苯基或丁基柱。

17.权利要求16的方法，其中所述柱包括苯基琼脂糖。

18.权利要求1的方法，其进一步包括过滤步骤，其中对所述HIC样品实施过滤，以去除病毒颗粒且促进缓冲液更换。

19.权利要求1的方法，其中所述HCP减少的抗体制剂包括抗IL-12抗体或其抗原结合部分。

20.权利要求19的方法，其中所述抗IL-12抗体或其抗原结合部分是人源化抗体、嵌合抗体或多价抗体。

21.权利要求20的方法，其中所述抗IL-12抗体或其抗原结合部分是人源化抗体。

22.权利要求20的方法，其中所述抗IL-12抗体或其抗原结合部分是分离的人抗体，其以约1 x 10^-8 M或更少的K_d和约1 x 10^-3 s^-1更少的K_off速率常数与人IL-12解离，两者都通过表面等离振子共振进行测定。