[发明专利]分泌高水平必需氨基酸的耐胆汁芽孢杆菌组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种芽孢杆菌组合物，其特征在于在胆汁盐(模拟的肠道环境)中快速出芽和生长以及分泌高水平的必需氨基酸。该芽孢杆菌组合物可用作动物饲料补充剂，在饲料中其具有益生(健康促进)作用并增加动物饲料中营养的消化和可利用度。

背景技术

益生菌诸如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)在动物饲料工业中用作膳食补充剂。其使用与芽孢杆菌代替或减少在动物饲料工业中用作生长促进剂的抗生素的使用的能力有关。

Christian Hansen A/S(丹麦)将此益生的生长促进产品的一个实例以商品名(保藏号为DSM 17231)实现商业化。为枯草芽孢杆菌孢子细胞组合物。

除了推荐的作用方式以外(例如，免疫调节、肠道菌群调节剂)，益生的芽孢杆菌能够产生许多有益的成分，诸如酶类，当其用作动物饲料补充剂时酶类被分泌至胃肠道(GIT)中。诸如植酸酶的酶类被分泌并改善动物饲料的消化和较好的摄取(更高的消化率)。膳食(饲料)主要为植物来源诸如谷物、玉米、大豆、豆油和氨基酸。所有这些作用都有利于生产低成本的动物产品。

益生芽孢杆菌(probiotic bacillus)也能够产生其他有益的成分诸如必需氨基酸。

芽孢杆菌孢子可通过酸性胃屏障，并在动物的胃肠道(GIT)内出芽和生长。此特性具有很大的优点，因为当被摄入时，它们可分泌许多类型的有益成分，例如，细菌素，并且还分泌有用的必需氨基酸。而且，在饲料粒化过程中，芽孢杆菌孢子是耐热的，因此其是使细菌素和例如必需氨基酸都进入GIT(胃肠道)的优异的递送系统。

在芽孢杆菌在胃肠道中的生存和增殖过程中，胆汁的作用很重要。胆汁在肝脏中产生并储存在胆囊中。胆汁含有水、卵磷脂、胆红素和胆绿素以及胆汁盐。

从文献中知道，胆汁对芽孢杆菌孢子细胞在动物胃肠道中的生存以及出芽并生长为营养细胞具有一些负面影响。因此正在进行研究以找到益生的耐胆汁的芽孢杆菌菌株。

文章(Antonie Van Leeuwenhoek.2006Aug；90(2)：139-46.Epub 2006年7月4日)说明了直接从鸡肠中分离许多芽孢杆菌标本/细胞。检测分离的芽孢杆菌细胞的益生活性。检测具有最高益生活性的6种芽孢杆菌的耐胆汁盐性，并且发现一株特定的高益生性的芽孢杆菌具有相对高水平的耐胆汁盐性。

在此文章中没有特别地将重点集中在检测耐胆汁性的任何时段。在实验部分，仅在胆汁盐存在5天后检测了芽孢杆菌孢子细胞的耐受性(见141页的段落“Simulated small intestinal fluid tolerance test”(“模拟的小肠液耐受试验”))。

US2003/0124104A说明了益生的常规芽孢杆菌内生孢子对低浓度的胆汁盐敏感，即，甚至低浓度的胆汁盐的存在都会抑制孢子出芽和/或再水化。这与其他细菌诸如肠道病原体，诸如大肠杆菌或金黄色葡萄球菌相反(见段落[0014]至[0015])。就此而言，建议筛选/选择对胆汁盐的抑制性活性具有抗性并因此能出芽成为营养细胞，然后在结肠定植的芽孢杆菌孢子(见[0019])。

在该说明书中提供的都是工作实施例，没有提供实际筛选的具体芽孢杆菌细胞的真实试验数据。

此外，胆汁盐筛选条件的说明是相对概括的。具体地，没有指出选择耐胆汁性的任何时段。换句话说，基于此文献的粗略或概括性的说明，可选择仅可缓慢生长(出芽)的芽孢杆菌细胞，即，能够在相应量的胆汁盐的存在下在例如20小时后从孢子出芽成为营养细胞的芽孢杆菌细胞。

在此文献中，没有对选择快速生长(出芽)的芽孢杆菌细胞，即，能够在相应量的胆汁盐的存在下在特定时间间隔内达到规定生长点的从孢子出芽并生长为营养细胞的芽孢杆菌细胞有任何描述或建议。

总之，关于耐胆汁芽孢杆菌细胞的选择/筛选的现有技术参考文献没有集中在从孢子细胞快速生长/出芽成为芽孢杆菌营养细胞。

申请号为PCT/EP2008/057296的国际PCT申请于11/06/2008提交。申请人为Chr.Hansen A/S且该申请在本申请的申请日时没有公开。

PCT/EP2008/057296描述了新的芽孢杆菌孢子，其特征在于在胆汁盐培养基的存在下其具有增加的/快速的从孢子出芽和生长为营养细胞的速度。

本文所述的芽孢杆菌孢子具有如PCT/EP2008/057296中所述同样的增加的/快速的从孢子出芽和生长为营养细胞的速度。