[发明专利]免疫球蛋白纯化

说明书

本发明属于多肽纯化领域。其报道了通过从杂质中，尤其是从聚集形式的免疫球蛋白中以及从免疫球蛋白片段中，分离溶液中的免疫球蛋白来提供单体形式的免疫球蛋白的方法。

发明背景

在当今的医学业界，蛋白质且特别是免疫球蛋白发挥了重要的作用。对于人类应用，每一治疗蛋白质都必须符合独特的标准。为了确保用于人类的生物药剂的安全性，必须特别地将可能造成伤害的核酸、病毒和宿主细胞蛋白质除去。为了符合质量管理规格标准(regulatory specification)，必须在发酵工艺后进行一步或多步的纯化。此外，纯度、生产率和产量在确定合适的纯化方法中起着重要的作用。

已经充分建立了不同的方法并广泛地用于蛋白质纯化，例如用微生物蛋白质的亲和层析(例如，A蛋白或G蛋白亲和层析)、离子交换层析(例如，阳离子交换的(磺丙基或羧甲基树脂)、阴离子交换的(氨乙基树脂)和混合模式的离子交换)、亲硫吸附(例如，用β-巯基乙醇和其他SH配体)、疏水相互作用或芳族吸附层析(例如，用苯基琼脂糖凝胶、亲杂氮芳基树脂(aza-arenophilic resin)或间氨基苯硼酸)、金属螯合亲和层析(例如，用镍(II)-和铜(II)-亲和材料)、大小排阻层析和电泳方法(例如凝胶电泳、毛细管电泳)(参见例如Vijayalakshmi，M.A.，Appl.Biochem.Biotech.75(1988)93-102)。

Necina，R，等人(Biotechnol.Bioeng.60(1998)689-698)报道了通过显示出高电荷密度的离子交换介质，直接从细胞培养上清液中捕获人单克隆抗体。在WO 89/05157中，报道了通过直接将细胞培养基进行阳离子交换处理来纯化产物免疫球蛋白的方法。Danielsson，A.，等人，J.Immunol.Meth.115(1998)，79-88描述了从小鼠腹水中一步纯化单克隆IgG抗体。

Mhatre，R.，等人，J.Chrom.A 707(1995)225-231，开发了通过阳离子交换层析和pH梯度洗脱来纯化抗体Fab片段。WO 94/00561报道了人单克隆抗猕猴抗体和产生该抗体的细胞系。在WO 2004/024866中报道了通过离子交换层析纯化多肽的方法，其中使用梯度洗涤将目的多肽从一种或多种污染物中分离。Schwarz，A.，等人，Laborpraxis 21(1997)62-66，报道了用CM-HyperD柱纯化单克隆抗体。WO 2004/076485报道了通过A蛋白和离子交换层析的抗体纯化方法。在EP 0 530 447中，报道了通过组合3步层析步骤来纯化IgG单克隆抗体的方法。在US 4,983,722中报道了从抗体制备物中去除A蛋白。

重组单克隆抗体工艺通常使用阴离子交换层析以结合痕量水平的杂质和潜在的污染物例如DNA、宿主细胞蛋白质和病毒，同时允许抗体流通(flow through)(Knudsen，H.L.，等人，J.Chrom.A 907(2001)145-154)。

WO 95/16037报道了通过A蛋白和阳离子交换层析进行的从杂种杂交瘤中纯化抗EGF-R/抗CD3双特异性单克隆抗体。在EP 1 084 136中报道了通过使用离子交换层析从其多聚体中分离抗体单体。US 5,429,746涉及应用疏水相互作用层析组合层析来纯化抗体分子蛋白质。在US 4,604,208中报道了用于过滤流体，特别是受到带电粒子污染的肠胃外液体或生物液体的阴离子修饰的微孔膜。WO 03/040166报道了设计用于去除在含蛋白质的流体中的痕量杂质的膜和设备。

回收多肽的方法报道于US 6,716,598中。在US 2006/0194953中，报道了用于从通过A蛋白亲和层析纯化的抗体中选择性去除泄露的(leaked)A蛋白质的方法。在WO 99/62936中报道了通过使用离子交换层析从聚集体中分离蛋白质单体。Lynch，P.和Londo，T.，Gen.Eng.News 11(1997)17，报道了用于从亲和纯化的治疗级抗体中去除聚集物的系统。Jiskoot，W.等人，J.Immunol.Meth.124(1989)143-156报道了意图用于在人中治疗性应用的鼠单克隆抗体的两步纯化。

发明概述